Фитохимический анализ на кумарины

2 г сырья заливали 20 мл спирта этилового и смесь нагревали на водяной бане в течение 15–20 минут в колбе с обратным холодильником. После охлаждения профильтровали через вату. Этот раствор испытывали на кумарины [12].

Реакция диазотирования.

Основана на способности кумаринов образовывать с ароматическими аминопроизводными окрашенные продукты [29].

К 1 мл извлечения добавляли 3 мл 0,1 н натрия гидроксида и нагревали на водяной бане. Смесь охлаждали и смешивали ее с 1 мл свежеприготовленного раствора диазосульфаниловой кислоты. При наличии кумаринов, в зависимости от их химической структуры, появляется окрашивание от красно-оранжевого до вишнево-красного [29].

Лактонная проба.

Реакция основана на способности кумаринов при нагревании в щелочной среде образовывать соли желтого цвета, растворимые в воде, которые при подкислении превращаются в исходные продукты, не растворимые в воде [29].

В пробирку наливали 1 мл извлечения, добавляли 0,5 мл 10 % раствора натрия гидроксида и нагревали на водяной бане до кипения. В присутствии кумаринов наблюдается желтое окрашивание. Содержимое пробирки охлаждали, добавляли 4 мл дистиллированной воды, 10 % раствор кислоты хлороводородной до кислой реакции по лакмусу. Появление осадка или помутнение раствора указывает на возможное присутствие кумаринов в сырье [29].

Фитохимический анализ на дубильные вещества

5 г измельченного сырья заливали 100 мл кипящей воды, нагревали на водяной бане в течение 15 мин, профильтровывали через бумажный фильтр. С полученным фильтратом проводили качественные реакции [29].

1.Общие качественные реакции.

а) Осаждение желатином. К 3–5 мл извлечения добавляли 2–3 капли 1% раствора желатина в 10 % растворе натрия хлорида. При наличии таннидов появляется осадок или муть от образовавшихся желатинтаннатов, растворимых в избытке реактива [29].

б) Реакция с бихроматом калия. К 3–5 мл извлечения добавляли 2–3 капли 5 % раствора калия бихромата. При наличии таннидов наблюдается потемнение раствора или выпадение желто-коричневого осадка [29].

г) Осаждение основным уксуснокислым свинцом. К 3–5 мл извлечения добавляли раствор свинца основного уксуснокислого. При наличии таннидов выпадает осадок [29].

д) Реакция с раствором Фолина-Дениса (смесь фосфорномолибденовой и фосфорновольфрамовой кислот). К 3–5 мл извлечения добавляли 3–5 капель раствора Фолина-Дениса и небольшое количество натрия карбоната. При наличии таннидов образуется вольфрамовая или молибденовая синь. Окраска устойчива [29].

2.Реакции отличия групп таннидов.

а) Цветная реакция с солями 3-хвалентного железа: к 2–3 мл настоя добавляли 3 капли 1 % раствора железоаммониевых квасцов. Гидролизуемые дубильные вещества дают черно-синее окрашивание, а конденсированные – черно-зеленое [29].

б) Проба с бромной водой. К 5 мл извлечения добавляли несколько капель бромной воды, и жидкость доводили до кипения. Результаты устанавливаются через 5 минут. Конденсированные дубильные вещества дают с бромной водой моментальное выпадение желто-оранжевого осадка. Гидролизуемые танниды образуют растворимые соединения, которые выпадают лишь при избытке брома и постепенно [29].

в) Проба со средним ацетатом свинца в уксуснокислой среде. К 3 мл извлечения прибавляли 6 мл 10 % уксусной кислоты и 3 мл 10 % раствора среднего уксуснокислого свинца. При наличии гидролизуемых таннидов выпадает белый осадок. Осадок отфильтровывали и к фильтрату добавляли 10 капель 10 % раствора железоаммонийных квасцов и 0,5 г натрия ацетата. При наличии в сырье конденсированных дубильных веществ фильтрат окрашивается в черно-зеленый цвет [29].