Техника окраска по Граму в модификации Синёва.

1. На фиксированный препарат наносят 2-3 капли воды и кладут полоску фильтровальной бумаги, пропитанной краской генцианвиолет. Окрашивают 1-2 минуты.

2. Снимают бумажку, сливают краску и, не промывая водой, наливают на препарат раствор Люголя на 1 минуту.

3. Сливают раствор Люголя и наливают на препарат спирт с йодом на 30 секунд. Промывают водой.

4. После этого окрашивают мазок водным фуксином в течение 1 минуты.

5. Промывают водой, высушивают препарат фильтровальной бумагой, микроскопируют. В результате окраски грамположительные микробы окрашиваются в фиолетовый цвет, грамотрицательные - в красный.

Отношение бактерий к окраске по Граму.

Кокки окрашиваются по Граму положительно, за исключением гонококков и менингококков. Палочки, не образующие спор, грамотрицательны, за исключением палочек дифтерии, туберкулёза и проказы. Палочки, образующие споры (бациллы и клостридии), - грамположительны. Извитые формы (вибрионы и спириллы) грамотрицательны.

Окраска по Цилю-Нильсену.

1. На фиксированный препарат помещают полоску фильтровальной бумаги, наливают карболовый фуксин Циля и осторожно нагревают на горелке до появления пара, не допуская кипения жидкости. Нагревание повторяют 3 раза.

2. Снимают бумагу, промывают водой.

3. Погружают 3 раза в 5% раствор серной кислоты.

4. Промывают препарат водой и докрашивают метиленовой синью 5 минут.

5. Промывают водой, высушивают препарат фильтровальной бумагой, микроскопируют.

Контрольные вопросы.

Перечислите и охарактеризуйте основные этапы развития микробиологии. Назовите основные открытия Л. Пастера, Р. Коха, И.И. Мечникова. Заслуги отечественных учёных в развитии микробиологии. Назовите отрасли микробиологии, разделы медицинской микробиологии. Значение микробиологии в работе провизора. Положение микроорганизмов среди других живых существ. Перечислите основные группы микроорганизмов. По каким признакам отличаются между собой эукариоты и прокариоты? Основные формы бактерий. Как называется кокки, располагающиеся: попарно, цепочкой, гроздьями, по четыре, пакетами? Как называются палочки, образующие споры? Как называются палочки, не образующие споры? Как называются извитые формы с одним завитком спирали? Как называются извитые формы с несколькими завитками? Методы исследования в микробиологии. Микроскопический метод: что изучает, с помощью чего? Устройство светового микроскопа. Что такое иммерсионная система? Правила работы с иммерсионной системой. Что такое разрешающая способность микроскопа и чему она равна у микроскопа с иммерсионной системой? Какова роль иммерсионного масла? Каким свойством должно обладать иммерсионное масло? Куда помещают иммерсионное масло при микроскопии? Нужно ли применять иммерсионное масло при микроскопии с объективом: x8, x40, x90?

Этапы приготовления препарата-мазка. Для чего фиксируют мазок? Способы фиксации мазков. Какие способы окраски называются простыми? Какие красители применяются для окраски бактерий? Какие способы окраски называются сложными, на чём они основаны? Как производится окраска по Граму в модификации Синёва: в какой цвет окрашиваются грамположительные бактерии, почему? В какой цвет окрашиваются грамотрицательные бактерии, почему? Чем обусловлена способность бактерий различно окрашиваться по Граму? Какие бактерии (кокки, палочки, извитые) красятся по Граму положительно и какие отрицательно? Из каких слоёв состоит клеточная стенка грамположительных и грамотрицательных бактерий? Какие бактерии (грамположительные или грамотрицательные) более чувствительны: а) к пенициллину, детергентам, к основным красителям; б) к азидам, окислителям, стрептомицину, переваривающему действию протеаз? Принцип и техника окраски по Цилю-Нильсену. Какие патогенные бактерии являются кислотоустойчивыми?