- •Часть 1
- •060301 Фармация
- •Пояснительная записка
- •Порядок работы в лаборатории
- •Оформление лабораторного журнала
- •Лабораторная работа № 1. Лабораторная посуда и оборудование
- •Мытье лабораторной посуды
- •Лабораторное оборудование
- •Подготовка воды для клинико-биохимических исследований
- •Калибровка мерной посуды
- •Применение международной системы единиц (си) в лабораторной практике
- •Методы расчета экспериментальных данных
- •Приготовление и исследование образцов
- •Экстр акция бав из растительных тканей
- •Приготовление гомогената из растительных тканей
- •Приготовление гомогената из тканей животных
- •Лабораторная работа № 2. Цветные реакции на белки и аминокислоты
- •Теоретические основы занятия
- •2.1. Биуретовая реакция (реакция пиотровского)
- •2.1.1. Обнаружение наличия пептидных связей в белках Ход работы
- •2.1.2. Обнаружение наличия пептидных связей в молекуле грамицидина
- •Ход работы
- •2.3. Ксантопротеиновая реакция (мульдера)
- •Ход работы
- •2.4. Реакция адамкевича
- •Ход работы
- •2.5. Реакция на цистеин (реакция фоля)
- •Ход работы
- •2.6. Реакция Ваузене (на триптофан)
- •Ход работы
- •2.7. Реакция с формальдегидом
- •Ход работы
- •2.8. Реакция шульце-распайля
- •Ход работы
- •2.9. Реакция миллона
- •Ход работы
- •2.10. Реакция паули (на гистидин и тирозин)
- •Ход работы
- •2.12. Взаимодействие α - аминокислот с солями меди (II)
- •Ход работы
- •3.2. Амфотерность аминокислот
- •Ход работы
- •3.3. Реакции аминокислот с растворами индикаторов Ход работы
- •3.4. Определение аминного азота медным способом
- •Ход работы
- •3.5. Кислотный гидролиз белка и формоловое титрование по серенсену
- •3.5.1. Кислотный гидролиз белка
- •Ход работы
- •3.5.2. Формоловое титрование
- •3.5.2.3. Открытие промежуточных продуктов распада белка в гидролизате при помощи биуретовой реакции
- •3.6. Определение содержание глицина
- •Ход работы
- •3.7. Определение содержания белка и казеина в молоке формольным методом
- •Ход работы
- •3.8. Определение содержания казеина в молоке по способу маттиопуло
- •Ход работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа № 4. Исследование свойств простых белков
- •Теоретические основы занятия
- •Указания по технике безопасности
- •4.1. Осаждение белка при нагревании
- •Ход работы
- •4.2. Осаждение белка концентрированными минеральными кислотами
- •Ход работы
- •4.3. Осаждение белка органическими кислотами
- •Ход работы
- •4.4. Осаждение белка солями тяжелых металлов
- •Ход работы
- •4.5. Осаждение белков органическими растворителями
- •Ход работы
- •4.6. Осаждение белка реактивами на алкалоиды
- •Ход работы
- •4.7. Горение как способ распознавания белковых материалов
- •Рекомендации к составлению протокола к работе №4
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа № 5. Выделение, очистка и исследование состава белка из биологических объектов
- •Теоретические основы занятия
- •Указания по технике безопасности
- •5.1. Высаливание белков
- •5.1.1. Высаливание белков сернокислым аммонием Ход работы
- •5.1.2. Высаливание белков хлористым натрием и сернокислым магнием
- •5.2. Диализ белков
- •Ход работы
- •5.3. Тонкослойная хроматография аминокислот
- •Ход работы
- •5.4. Выделение белков из природных материалов
- •5.4.1. Выделение яичного альбумина
- •Ход работы
- •5.4.2. Выделение белков из семян злаковых и бобовых
- •5.4.2.1.Выделение альбуминов
- •Ход работы
- •5.4.2.2. Выделение глобулинов
- •Ход работы
- •5.4.2.3. Выделение проламинов
- •Ход работы
- •5.4.3. Выделение белков мяса
- •Ход работы
- •5.4.3.1. Экстракция альбуминов
- •5.4.3.2. Экстракция глобулинов
- •Ход работы
- •5.4.6. Изучение свойств кератинов
- •5.4.6.1. Действие воды и разбавленных кислот
- •Контрольные вопросы
- •Теоретические основы занятия
- •6.1. Исследование свойств желатина
- •6.1.1. Определение изоэлектрической точки желатина по минимуму набухания
- •6.2.2. Определение влагосвязывающей способности казеина
- •Ход работы
- •6.2.3. Определение изоэлектрической точки казеина
- •Ход работы в шести пробирках готовят буферные смеси с различным значением рН, смешивая указанные количества растворов (табл. 11).
- •6.3. Растворимость белков
- •Ход работы
- •6.4. Адсорбция белков на высокодисперсном кремнеземе (аэросиле)
- •Ход работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа № 7. Исследование состава сложных белков
- •Теоретические основы занятия
- •7.1. Исследование химического состава нуклеопротеидов
- •Ход работы
- •Ход работы
- •7.4. Исследование химического состава гликопротеидов
- •7.5. Исследование химического состава фосфопротеидов
- •7.5.1. Выделение казеина из молока
- •Ход работы
- •7.6. Исследование химического состава хромопротеидов
- •7.6.1. Хроматографическое разделение растительных пигментов на бумаге
- •Ход работы
- •7.6.2. Разделение пигментов листа (по краусу)
- •Ход работы
- •7.6.3. Исследование химических свойств хлорофилла
- •7.6.3.1. Омыление хлорофилла
- •Ход работы
- •7.6.3.2. Омыление спиртовой вытяжки хлорофилла
- •7.6.3.3. Получение феофитина
- •7.6.3.4. Восстановление металло-органической связи в хлорофилле
- •Рекомендации к составлению протокола
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа № 8. Качественный анализ водорастворимых витаминов
- •Теоретические основы занятия
- •8.1. Определение тиамина (витамин в1)
- •Ход работы
- •8.3. Определение пиридоксина (витамин в6)
- •Ход работы
- •8.4. Реакция на цианкобаламин (витамин в12)
- •Ход работы
- •8.5. Определение никотиновой кислоты (витамин рр)
- •8.6.1. Реакция с хлоридом железа
- •Ход работы
- •8.7. Качественное открытие аскорбиновой кислоты (витамин с)
- •8.7.1. Реакция с железосинеродистым калием
- •Ход работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа № 9. Качественный анализ жирорастворимых витаминов
- •Теоретические основы занятия
- •9.1. Определение ретинола (витамин а)
- •9.3. Качественная реакция на -токоферол (витамин е)
- •9.5.2. Реакция со щелочным раствором цистеина
- •Знаете ли вы что
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа № 10. Количественный анализ витаминов
- •Теоретические основы занятия
- •10.1. Количественное определение содержания витамина с по методу тильманса
- •10.1.1.Определение витамина с в шиповнике или хвое Ход работы
- •10.3. Определение витамина с йодометрическим методом
- •Ход работы
- •10.4. Определение витамина с методом тонкослойной хроматографии
- •Ход работы
- •10.5. Количественное определение витамин р (рутина) в чае по левенталю
- •Ход работы
- •Контрольные вопросы
- •Открытие ферментов в биологических объектах
- •Теоретические основы занятия
- •11.1. Открытие альдегидоксидазы в сыром молоке
- •Ход работы
- •11.2. Выделение уреазы из соевой муки
- •Ход работы
- •11.3. Исследование действия пероксидазы
- •11.3.1. Выделение пероксидазы редьки Ход работы
- •11.3.2. Выделение пероксидазы капусты Ход работы
- •Ход работы
- •Контрольные вопросы
- •Ход работы
- •Рекомендации к составлению протокола
- •12.2. Количественное определение активности амилазы по приросту мальтозы
- •Ход работы
- •12.2. Определение активности уреазы
- •Ход работы
- •12.3. Определение активности сахаразы
- •Ход работы
- •12.4. Определение активности каталазы
- •12.4.1. Определение активности каталазы в муке
- •12.4.2. Определение активности каталазы в картофеле
- •Контрольные вопросы
- •Теоретические основы занятия
- •13.1. Термолабильность α -амилазы слюны
- •Ход работы
- •13.2. Действие амилазы на сырой и вареный крахмал
- •Ход работы
- •13.3. Определение оптимальной температуры действия ферментов
- •Ход работы
- •13.4. Установление термолабильности уреазы
- •Ход работы
- •13.5. Влияние температуры на активность пепсина
- •Ход работы
- •13.6. Влияние температуры на смещение химичесокого равновесия Ход работы
- •Знаете ли вы что
- •Контрольные вопросы
- •Активарование и ингибирование ферментов
- •Теоретические основы занятия
- •14.1. Активирование и ингибирование амилазы слюны
- •Ход работы
- •14.2. Ингибирующее действие ионов на дегидрогеназный комплекс картофеля Ход работы
- •14.3. Влияние желчи на активность липазы
- •Ход работы
- •14.4. Влияние электролитов на активность амилазы Ход работы
- •14.5. Определение влияния различных веществ на активность каталазы
- •Ход работы
- •14.6. Белки как противоядие для ионов тяжелых металлов
- •Ход работы
- •14.7. Воздействие формальдегида на активность амилазы
- •Ход работы
- •Контрольные вопросы
- •Теоретические основы занятия
- •15.1. Влияние рН на активность трипсина
- •Ход работы
- •15.2. Зависимость ферментативной активности амилазы слюны от рН реакции среды
- •Ход работы
- •Рекомендации к составлению протокола
- •15.3. Влияние рН на активность амилазы солода Ход работы
- •Рекомендации к составлению протокола
- •15.4. Влияние рн среды на активность каталазы Ход работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №16.
- •16.2. Специфичность действия амилазы
- •Ход работы
- •16.3. Специфичность действия сахаразы
- •Ход работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа № 17. Реакции на открытие моносахаридов. Свойства углеводов
- •Теоретические основы занятия
- •17.1. Реакция «серебряного зеркала»
- •Ход работы
- •17.4. Проба бенедикта на глюкозу
- •Ход работы
- •17.5. Реакция молиша
- •Ход работы
- •17.6. Цветная реакция с ванилином на фруктозу
- •17.10. Проба гайнеса
- •17.12.2. Реакция с соляной кислотой
- •17.13. Взаимодействие сахаров со щелочами
- •Ход работы
- •17.14. Окисление альдозы и кетозы йодом Ход работы
- •17.15. Действие на углеводы реактива фелинга
- •Лабораторная работа №18. Реакции на открытие олигосахаридов. Свойства углеводов
- •Теоретические основы занятия
- •18.9. Определение дисахаридов аммиачным раствором оксида серебра
- •Ход работы
- •18.10. Гидролиз сахарозы
- •Ход работы
- •18.11. Изменение сахара при нагревании Ход работы
- •18.12. Получение искусственного меда
- •Ход работы
- •18.13. Исследование меда
- •Ход работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №19. Реакции на открытие полисахаридов. Свойства углеводов
- •Теоретические основы занятия
- •19.1. Выделение крахмала
- •Ход работы
- •19.2. Реакция полисахаридов с йодом
- •Ход работы
- •19.3. Действие на полисахариды реактива фелинга
- •Ход работы
- •19.4. Реакции с крахмальным клейстером Ход работы
- •19.5. Образование декстрина и его реакции
- •Ход работы
- •19.6. Растворение целлюлозы в медноаммиачном растворе
- •Ход работы
- •19.7. Получение коллодия
- •Ход работы
- •19.10. Гидролиз клетчатки до глюкозы
- •Ход работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №20. Методы количественного определения углеводов
- •Теоретические основы занятия
- •20.1. Хроматографический анализ углеводов
- •Ход работы
- •20.2. Йодометрический метод определения лактозы
- •Ход работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №21. Определение редуцирующих сахаров в растительном материале
- •Теоретические основы занятия
- •21.1. Приготовление вытяжки Ход работы
- •21.2. Определение редуцирующих сахаров по лэну и эйнону
- •Ход работы
- •21.3. Определение сахарозы
- •Ход работы
- •21.4. Определение титра реактива фелинга
- •Ход работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №22. Получение и исследование свойств пектиновых веществ
- •Теоретические основы занятия
- •22.1.Выделение растворимого пектина Ход работы
- •22.2. Качественное обнаружение пектиновых веществ (реакция эрлиха) Ход работы
- •22.3. Экстракция пектина Ход работы
- •22.4. Приготовление пектиновой кислоты Ход работы
- •22.5. Приготовление пектиновой кислоты промыванием минеральной кислотой Ход работы
- •23.1. Выделение гликогена из дрожжей
- •Ход работы
- •Расчёт результатов
- •Лабораторная работа №24. Определение липидов и изучение их свойств
- •Теоретические основы занятия
- •Техника безопасности
- •24.1. Метод тонкослойной хроматографии
- •Ход работы
- •24.2.Определение массовой доли свободно извлекаемого жира
- •Ход работы
- •24.3. Определение нелипидных примесей Ход работы
- •24.4. Жировые эмульсии
- •24.4.1.Оценка эмульгирующей способности эмульгатора
- •Ход работы
- •24.4.2. Оценка стабильности жировой эмульсии
- •Ход работы
- •24.5. Растворение и эмульгирование жиров
- •Ход работы
- •24.6. Исследование действия эмульгаторов
- •Ход работы
- •24.7. Плавление и затвердевание жиров
- •Ход работы
- •25.3.2. Реакция сальковского
- •25.3.3. Реакция либерманна—бурхардта
- •25.4. Качественная реакция выявления кетоновых тел в молоке
- •Ход работы
- •Ход работы
- •25.7. Обнаружение стеролов в растительном масле Ход работы
- •25.8. Демонстрация кислых свойств жирних кислот
- •Ход работы
- •25.9. Определение холинсодержащих фосфолипидов в смеси липидов
- •26.1. Получение натриевого твердого мыла
- •26.1.1. Получение мыла из жира Ход работы
- •26.1.2. Получение мыла из стеарина
- •26.1.3. Получение мыла из воска
- •26.2. Получение калиевого жидкого мыла
- •26.3. Определение содержания жирных кислот в твердом мыле
- •26.4. Определение содержания жирных кислот в жидком мыле
- •26.8. Моющее действие мыла
- •Ход работы
- •26.9. Действие жесткой воды на мыло
- •Ход работы
- •26.12. Стеариновая кислота — кислота слабая
- •Ход работы
- •Контрольные вопросы
- •27.1. Количественная оценка степени ненасыщенности липидов по йодному числу
- •Ход работы
- •27.2. Количественное определение перекисного числа
- •Ход работы
- •27.3. Определение кислотного числа
- •Ход работы
- •27.4. Определение эфирного числа
- •27.5. Определение содержания кислот в жирах
- •Ход работы
- •27.9. Обнаружение перекисных соединений
- •Ход работы
- •Контрольные вопросы
- •Приложение
- •Водородный показатель некоторых биологических жидкостей
- •Rf аминокислот для идентификации хроматографией в бутилово-уксусно-водной смеси 4:1:5
- •Термины, различающиеся по смыслу, но сходные по звучанию
- •Литература Основная
- •Интернет-источники
Ход работы
В одну пробирку вносят 2 капли свежего подсолнечного масла, в другую - 2 капли несвежего. Добавляют в каждую пробирку по 10 капель смеси ледяной уксусной кислоты с хлороформом, по 5 капель раствора йодистого калия и встряхивают. Затем еще по 2 капли 0,5% раствора крахмала. Одна пробирка остается бесцветной, в другой - жидкость окрашивается в синий цвет (несвежей масло). В пробирку, окрашенную в синий цвет, добавляют по каплям раствор гипосульфита и наблюдают исчезновение синей окраски. Чем больше капель гипосульфита пошло на обесцвечивание, тем выше содержание перекисных соединений.
Контрольные вопросы
Физические свойства липидов.
Объясните принцип метода определения йодного числа. Для чего определяют йодное число, что оно показывает?
Объясните принцип метода определения перекисных соединений. Для чего определяют перекисное число, что оно показывает?
Объясните принцип метода определения кислотного числа. Для чего определяют кислотное число, что оно показывает?
Что такое эфирное число, как его определяют?
Какой химический процесс лежит в основе прогоркания жиров?
От чего зависит консистенция жира?
Приложение
Таблица 1
Водородный показатель некоторых биологических жидкостей
Биологическая жидкость |
рН |
Кровь артериальная Желудочный сок Желчь Сок поджелудочной железы Кишечный сок Моча Пот Слюна Слеза |
7,4-7,5 1,5-1,8 6,2-8,5 7,8-8,4 6,0-6,8 5,0-7,0 3,8-6,5 6,8-7,2 7,4-8,4 |
Таблица 2
Изоэлектрические точки некоторых белков и ферментов (рI)
Белки |
Изоэлектрическая точка |
Пепсин желудочного сока |
2,0 |
Казеин молока |
4,6 |
Миозин мышц |
5,0 |
Амилаза слюны |
7,0 |
Трипсин сока 12-перстной кишки |
7,9 |
Химотрипсин сока поджелудочной железы |
8,6 |
Таблица 3
Rf аминокислот для идентификации хроматографией в бутилово-уксусно-водной смеси 4:1:5
Аминокислота |
Rf |
Цистин |
0,05 |
Цистеин |
0,08 |
Лизин |
0,10 |
Гистидин |
0,11 |
Аргинин |
0,12 |
Аспарагиновая кислота |
0,15 |
Серин |
0,16 |
Глицин |
0,17 |
Глутаминовая кислота |
0,18 |
Треонин |
0,19 |
Аланин |
0,25 |
Пролин |
0,27 |
Тирозин |
0,28 |
Триптофан |
0,43 |
Метионин |
0,44 |
Валин |
0,45 |
Фенилаланин |
0,53 |
Изолейцин |
0,59 |
Лейцин |
0,61 |
Норлейцин |
0,63 |
Таблица 4
Классификация ферментов
Группа |
Катализируемая реакция |
Примеры ферментов |
Оксидоредуктазы |
катализируют окислительно - восстановительные процессы, осуществляют перенос атомов Н и О или электронов от одного субстрата к другому |
Дегидрогеназы, оксидаза, пероскидазы, каталазы, редуктазы, монооксидазы, диоксигеназы |
Трансферазы |
катализируют реакции переноса функциональных групп и молекулярных остатков с одной молекулы на другую |
Трансаминазы, гликозилтрансферазы, аминотрансферезы, фосфаттрансферазы |
Гидролазы |
катализируют реакции гидролиза, акцептором является молекула воды, а из субстрата образуется два продукта |
Липаза, амилаза, пептидаза, эстераза, гликозидаза, фосфатазы |
Лиазы |
катализируют реакции отщепления с образованием двойной связи либо присоединения по двойной связи и негидролитический распад соединений либо синтез без участия АТФ |
Декарбоксилазы, фумаразы, альдолазы |
Изомеразы |
катализируют процессы изменения геометрической или пространственной конфигурации |
Изомеразы, мутаза, внутримолекулярные трансферазы |
Лигазы |
катализируют реакции синтеза, сопровождающиеся гидролизом богатой энергией связи (АТФ) |
Синтетазы, периваткарбоксилаза, глутаминсинтетазы |