Контрольные вопросы

1. Пути мобилизации полисахаридов в организме животных, растений и микроорганизмов.

2. Роль крахмала в зернах злаковых и развивающихся растениях.

3. Какие углеводы подвергаются изменениям при тепловой обработке продуктов?

4. Из каких двух фракций состоит крахмал? Биологическая роль крахмала?

5. Какие еще полисахариды вы знаете?

6. В чем различие в строении крахмала, клетчатки, инулина? Напишите формулы.

7. Что является продуктами гидролиза полисахаридов в общем случае?

8. Назовите растениях в которых содержится много крахмала?

Лабораторная работа №20. Методы количественного определения углеводов

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: Научиться количественно определять содержание углеводов.

Теоретические основы занятия

Углеводы широко распространены в природе, они встречаются в свободной или связанной форме в любой растительной, животной или бактериальной клетке. Наиболее распространенный углевод – целлюлоза, структурный компонент деревьев и других растений. Главный пищевой ингредиент – крахмал.

Углеводы образуются в растениях в процессе фотосинтеза (80% сухого вещества растений составляют углеводы) и служат источником энергии для животных, питающихся этими растениями. Кроме этого, углеводы являются основным структурным материалом растений, составной частью нуклеиновых кислот, играющих важную роль в процессе биосинтеза белка.

20.1. Хроматографический анализ углеводов

Метод основан на неодинаковой способности углеводов адсорбироваться на тех или иных адсорбентах и различной растворимости в смешивающихся жидкостях.

Ход работы

На пластинах наносят 1 мл 5% водного раствора сахаров в виде сплошной полосы длиной 2-5 мм, отступая от бокового и нижнего краев пластины на расстоянии 1 см. Пластинку вертикально помещают в камеру, которая заполнена разделяющей смесью до высоты 0,5 см. Состав разделяющей смеси можно взять любой из таблицы 32, например: н-бутанол - уксусная кислота - вода (60 мл-15 мл-25 мл). Пластинку выдерживают в камере до тех пор, пока высота подъема фронта восходящего растворителя не достигнет отмеченной длины разделительного пути, составляющая 9 см. По окончании разделения пластинку вынимаю из камеры и сушат при комнатной температуре в вытяжном шкафу до испарения остатков растворителя.

Высушенные пластинки погружают в реагент, представляющий собой следующую смесь: н-бутанол - вода - уксусная кислота - фосфорная кислота – анилин - дефиниламин (60 мл-25 мл-15 мл- 10 мл- 1 мл- 2 г). Пластинки снова высушивают и проявляют в термостате при температуре 120 С в течение 5 минут.

После проявления сопоставляют расположение пятен сахаров, которое будет различным в силу разной степени подвижности веществ (табл. 32). Степень подвижности сахаров на хроматограмме выражают через соотношение пути, пройденного данным соединением от линии старта к расстоянию, пройденному фронтом растворителя (R_f):

R_f = a/b

где, a- расстояние от линии старта до центра пятна; b- расстояние от старта до финиша.

Таблица 32 - Значения R_f некоторых углеводов

Вещество	А		Б		В	Г		Д	Е		Ж		З
	С1	С2	С3	С4	С5	С6	С7	С8	С9	С10	С11	С12	С13
Глюкоза	17	14	42	46	37	13	100	74	45	39	32	100	34
Ксилоза	39	45	39	54	100	27	126	-	57	49	-	155	56
Галактоза	18	11	32	40	30	12	-	67	42	35	37	83	-
Лактоза	4	-	25	23	8	-	47	43	34	26	12	36	33
Рамноза	62	78	52	60	140	49	-	-	60	55	-	210	66
Манноза	23	-	32	60	46	19	-	-	47	42	37	115	43
Мальтоза	6	-	-	32	10	34	61	55	39	30	-	53	-
Сахароза	8	-	29	36	-	40	74	59	44	39	-	66	-

Обозначения:

А - кремнезем, обработанный буфером; Б - силикагель; В - силикагель (готовые пластинки); Г - силикагель, обработанный буфером; Д - силикагель, борная кислота; Е - алусил; Ж - целлюлоза; З - тальк.

С1 этилацетат - 65%-й пропанол-2(65:35); С2 этилацетат - 65%-й пропанол-2 - вода (4:1:0,5); С3 метилэтилкетон - уксусная кислота - метанол (1:1:3); С4 бутанол - этилацетат - пропанол-2 - уксусная кислота - вода (35:100:60:35:30); С5 ацетонитрил - сероуглерод - вода (85:5:10); С6 бутанол - ацетон - вода (4:5:1); С7 хлороформ - уксусная кислота - вода (3:3,5:0,5); С8 метилэтилкетон - уксусная кислота - метанол (6:2:2); С9 пропанол - этилацетат - вода - 25%-й аммиак (5:1:1:3); С10 пропанол - этилацетат - вода - 25%-й аммиак (6:1:3:1); С11 бутанол - пиридин - вода (10:3:3); С12 вода - этилацетат - пиридин (25:100:35); С13 бутанол - вода - муравьиная кислота (5:5:1).