Ход работы

Готовят 5 буферных растворов с рН от 5,6 до 7,8, как указано в таблице 25.

Таблица 25 – Приготовление буферных растворов

№	рН	Количество 0,2 М раствора Na2HPO3, мл	Количество 0,1 М раствора лимонной кислоты, мл
1	5,6	2,90	2,10
2	6,4	3,45	1,55
3	6,8	3,65	1,15
4	7,2	4,35	0,63
5	7,8	4,80	0,20

К 5 мл приготовленных смесей добавляют по 0,5 мл слюны, разбавленной водой в 10 раз и 0,5 мл крахмала. Содержимое пробирок тщательно перемешивают и ставят в термостат при 37 С на 10 минут. После чего из пробирки 3 отбирают несколько капель жидкости и на стекле смешивают с I₂ в КI. Если получается синее окрашивание, то реакцию с йодом повторяют каждые 5 минут до тех пор, пока не будет красного или оранжевого окрашивания, которое указывает на близкий конец гидролиза. Через 2-3 минуты после появления подобной окраски все пробирки вынимают из термостата и помещают в стакан со льдом. После этого быстро добавляют в каждую пробирку по 2-3 капли раствора йода, перемешивают и отмечают окраску. Оптимальная рН для амилазы слюны будет в той пробирке, в которой крахмал полностью расщепился (при реакции с йодом окраска будет желтой). Фиолетовое, красно-фиолетовое и бурое окрашивание показывает меньшую степень расщепления крахмала.

Результаты опыта занести в таблицу 26.

Таблица 26 - Зависимость активности амилазы слюны от рН среды

№ пробы	рН среды	Окраска с йодом	Оптимум рН
1	5,6
2	6,4
3	6,8
4	7,2
5	7,8

Рекомендации к составлению протокола

Зависимость активности амилазы от рН среды представить графически, откладывая по оси абсцисс значение рН среды, при котором проводился гидролиз крахмала, а по оси ординат — время в минутах, необходимое для гидролиза крахмала до стадии эритродекстрина. Сделать вывод, при каком значении рН оптимум действия фермента.

15.3. Влияние рН на активность амилазы солода Ход работы

Нумеруют 5 пробирок и в каждую вносят по 4 мл буферного раствора со следующими значениями рН: 2,87; 4,10; 5,33; 6,59; и 7,96 или близкими к каждому из этих значений.

Буферные растворы нужных значений рН готовят смешение раствора № 1 и раствора № 2 в соответствии с таблицей 27.

Таблица 27 - Составление буферных растворов для амилазы солода

Раствор, мл		рН
№ 1	№ 2
100,0	17,5	2,86
100,0	25,0	4,10
100,0	37,5	5,33
100,0	47,5	6,59
100,0	60,0	7,96

Раствор № 1 с рН 1,81: в колбе вместимостью 1 л растворяют 0,04 моль борной кислоты, 0,04 моль фосфорной кислоты, 0,04 моль уксусной кислоты.

Раствор № 2: представляет собой раствор с концентрацией гидроксида натрия 0,2 моль/л

Во все пробирки добавляют по 2 мл 1% раствора крахмала и по 0,5 мл вытяжки из солода. Содержимое перемешивают и в дальнейшем поступают точно так же, как описано ранее. Результат оформить в виде таблицы 28.

Таблица 28 - Влияние рН на активность амилазы солода

Показатели	Номера пробирок
	1	2	3	4	5
рН	2,87	4,10	5,33	6,59	7,96
Окраска с йодом