10.4. Определение витамина с методом тонкослойной хроматографии

Можно использовать несколько различных систем определения для аскорбиновой методом ТСХ (таблицу 17). Проявление хроматограмм с аскорбиновой кислоты проводится фосфорномолибденовым реактивом или в парах йода.

Ход работы

На пластинке силуфола на расстоянии 1 см от нижнего края намечают линию старта. На стартовую линию капилляром наносят пробы 1% раствора аскорбиновой кислоты в качестве метчика и соки лимона и апельсина так, чтобы расстояние пятен от боковых краев и между собой было не менее 1 см. Когда пятна подсохнут, пластинку помещают в камеру, на дно которой налито 5 мл смеси для разделения.

После достижения растворителем верхней границы, вынимают пластинку, отмечают линию фронта растворителя и высушивают пластинку. Для обнаружения соединений помещают пластинку в эксикатор с парами йода или обрабатывают пластинку фосфорномолибденовым реактивом.

Отмечают проявившиеся пятна и определяют Rf аскорбиновой кислоты.

Таблица 17 - Хроматографирование аскорбиновой кислоты

№	Элюент	Rf
1	Этанол — гексан (3:1)	0,86
2	Этилацетат — кислота уксусная ледяная (8:2)	0,88
3	бензол — этанол — уксусная кислота — ацетон (70:20:5:5)	0,75

10.5. Количественное определение витамин р (рутина) в чае по левенталю

Известно несколько соединений, обладающих Р-витаминной активностью. В основе их лежит скелет флавона.

Наиболее изучены строение и свойства рутина.

Рутин - кристаллическое вещество желто-оранжевой окраски. Содержится во всех продуктах, в которых обнаруживается витамин С. Много его в чае, фруктах, ягодах (бруснике, клюкве, сливе, винограде). Рутин участвует в окислительно-восстановительных процессах. Его присутствие усиливает окислительно-восстановительный эффект витамина С.

Количественное определение рутина основано на его способности окисляться перманганатом калия.

В качестве индикатора применяют индигокармин, который вступает в реакцию с перманганатом после полного окисления всего рутина. Экспериментально установлено, что 1 мл 0,05 н. раствора перманганата калия окисляет 3,2 мкг (0,00506 мкмоль) рутина. В черном чае содержится 300-500 мг/кг (474-790 мкмоль/кг) рутина.

Ход работы

К 0,1 г черного и зеленого чая приливают по 50 мл горячей дистиллированной воды и проводят экстракцию в течение 5 мин. Отмеривают в конические колбочки по 10 мл экстракта, добавляют по 10 мл дистиллированной воды и 10 капель индигокармина (появляется синяя окраска). Титруют раствором перманганата калия до появления устойчивой желтой окраски. Расчеты производят по формуле:

X = 3,2∙(0,00506)∙a∙50∙1000/10∙0,1 (мкг(мкмоль)/кг)

где 3,2·(0,00506) - количество рутина (мкг, мкмоль), соответствующее 1 мл 0,05 н раствора перманганата калия; a - количество 0,05 н раствора перманганата калия, израсходованное на титрование, мл; 10 - количество вытяжки, взятое для титрования, мл; 50 - общий объем экстракта; 0,1 - масса сухого вещества, мг; 1000- коэффициент пересчета на 1 кг сухого вещества.