
- •Часть 1
- •060301 Фармация
- •Пояснительная записка
- •Порядок работы в лаборатории
- •Оформление лабораторного журнала
- •Лабораторная работа № 1. Лабораторная посуда и оборудование
- •Мытье лабораторной посуды
- •Лабораторное оборудование
- •Подготовка воды для клинико-биохимических исследований
- •Калибровка мерной посуды
- •Применение международной системы единиц (си) в лабораторной практике
- •Методы расчета экспериментальных данных
- •Приготовление и исследование образцов
- •Экстр акция бав из растительных тканей
- •Приготовление гомогената из растительных тканей
- •Приготовление гомогената из тканей животных
- •Лабораторная работа № 2. Цветные реакции на белки и аминокислоты
- •Теоретические основы занятия
- •2.1. Биуретовая реакция (реакция пиотровского)
- •2.1.1. Обнаружение наличия пептидных связей в белках Ход работы
- •2.1.2. Обнаружение наличия пептидных связей в молекуле грамицидина
- •Ход работы
- •2.3. Ксантопротеиновая реакция (мульдера)
- •Ход работы
- •2.4. Реакция адамкевича
- •Ход работы
- •2.5. Реакция на цистеин (реакция фоля)
- •Ход работы
- •2.6. Реакция Ваузене (на триптофан)
- •Ход работы
- •2.7. Реакция с формальдегидом
- •Ход работы
- •2.8. Реакция шульце-распайля
- •Ход работы
- •2.9. Реакция миллона
- •Ход работы
- •2.10. Реакция паули (на гистидин и тирозин)
- •Ход работы
- •2.12. Взаимодействие α - аминокислот с солями меди (II)
- •Ход работы
- •3.2. Амфотерность аминокислот
- •Ход работы
- •3.3. Реакции аминокислот с растворами индикаторов Ход работы
- •3.4. Определение аминного азота медным способом
- •Ход работы
- •3.5. Кислотный гидролиз белка и формоловое титрование по серенсену
- •3.5.1. Кислотный гидролиз белка
- •Ход работы
- •3.5.2. Формоловое титрование
- •3.5.2.3. Открытие промежуточных продуктов распада белка в гидролизате при помощи биуретовой реакции
- •3.6. Определение содержание глицина
- •Ход работы
- •3.7. Определение содержания белка и казеина в молоке формольным методом
- •Ход работы
- •3.8. Определение содержания казеина в молоке по способу маттиопуло
- •Ход работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа № 4. Исследование свойств простых белков
- •Теоретические основы занятия
- •Указания по технике безопасности
- •4.1. Осаждение белка при нагревании
- •Ход работы
- •4.2. Осаждение белка концентрированными минеральными кислотами
- •Ход работы
- •4.3. Осаждение белка органическими кислотами
- •Ход работы
- •4.4. Осаждение белка солями тяжелых металлов
- •Ход работы
- •4.5. Осаждение белков органическими растворителями
- •Ход работы
- •4.6. Осаждение белка реактивами на алкалоиды
- •Ход работы
- •4.7. Горение как способ распознавания белковых материалов
- •Рекомендации к составлению протокола к работе №4
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа № 5. Выделение, очистка и исследование состава белка из биологических объектов
- •Теоретические основы занятия
- •Указания по технике безопасности
- •5.1. Высаливание белков
- •5.1.1. Высаливание белков сернокислым аммонием Ход работы
- •5.1.2. Высаливание белков хлористым натрием и сернокислым магнием
- •5.2. Диализ белков
- •Ход работы
- •5.3. Тонкослойная хроматография аминокислот
- •Ход работы
- •5.4. Выделение белков из природных материалов
- •5.4.1. Выделение яичного альбумина
- •Ход работы
- •5.4.2. Выделение белков из семян злаковых и бобовых
- •5.4.2.1.Выделение альбуминов
- •Ход работы
- •5.4.2.2. Выделение глобулинов
- •Ход работы
- •5.4.2.3. Выделение проламинов
- •Ход работы
- •5.4.3. Выделение белков мяса
- •Ход работы
- •5.4.3.1. Экстракция альбуминов
- •5.4.3.2. Экстракция глобулинов
- •Ход работы
- •5.4.6. Изучение свойств кератинов
- •5.4.6.1. Действие воды и разбавленных кислот
- •Контрольные вопросы
- •Теоретические основы занятия
- •6.1. Исследование свойств желатина
- •6.1.1. Определение изоэлектрической точки желатина по минимуму набухания
- •6.2.2. Определение влагосвязывающей способности казеина
- •Ход работы
- •6.2.3. Определение изоэлектрической точки казеина
- •Ход работы в шести пробирках готовят буферные смеси с различным значением рН, смешивая указанные количества растворов (табл. 11).
- •6.3. Растворимость белков
- •Ход работы
- •6.4. Адсорбция белков на высокодисперсном кремнеземе (аэросиле)
- •Ход работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа № 7. Исследование состава сложных белков
- •Теоретические основы занятия
- •7.1. Исследование химического состава нуклеопротеидов
- •Ход работы
- •Ход работы
- •7.4. Исследование химического состава гликопротеидов
- •7.5. Исследование химического состава фосфопротеидов
- •7.5.1. Выделение казеина из молока
- •Ход работы
- •7.6. Исследование химического состава хромопротеидов
- •7.6.1. Хроматографическое разделение растительных пигментов на бумаге
- •Ход работы
- •7.6.2. Разделение пигментов листа (по краусу)
- •Ход работы
- •7.6.3. Исследование химических свойств хлорофилла
- •7.6.3.1. Омыление хлорофилла
- •Ход работы
- •7.6.3.2. Омыление спиртовой вытяжки хлорофилла
- •7.6.3.3. Получение феофитина
- •7.6.3.4. Восстановление металло-органической связи в хлорофилле
- •Рекомендации к составлению протокола
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа № 8. Качественный анализ водорастворимых витаминов
- •Теоретические основы занятия
- •8.1. Определение тиамина (витамин в1)
- •Ход работы
- •8.3. Определение пиридоксина (витамин в6)
- •Ход работы
- •8.4. Реакция на цианкобаламин (витамин в12)
- •Ход работы
- •8.5. Определение никотиновой кислоты (витамин рр)
- •8.6.1. Реакция с хлоридом железа
- •Ход работы
- •8.7. Качественное открытие аскорбиновой кислоты (витамин с)
- •8.7.1. Реакция с железосинеродистым калием
- •Ход работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа № 9. Качественный анализ жирорастворимых витаминов
- •Теоретические основы занятия
- •9.1. Определение ретинола (витамин а)
- •9.3. Качественная реакция на -токоферол (витамин е)
- •9.5.2. Реакция со щелочным раствором цистеина
- •Знаете ли вы что
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа № 10. Количественный анализ витаминов
- •Теоретические основы занятия
- •10.1. Количественное определение содержания витамина с по методу тильманса
- •10.1.1.Определение витамина с в шиповнике или хвое Ход работы
- •10.3. Определение витамина с йодометрическим методом
- •Ход работы
- •10.4. Определение витамина с методом тонкослойной хроматографии
- •Ход работы
- •10.5. Количественное определение витамин р (рутина) в чае по левенталю
- •Ход работы
- •Контрольные вопросы
- •Открытие ферментов в биологических объектах
- •Теоретические основы занятия
- •11.1. Открытие альдегидоксидазы в сыром молоке
- •Ход работы
- •11.2. Выделение уреазы из соевой муки
- •Ход работы
- •11.3. Исследование действия пероксидазы
- •11.3.1. Выделение пероксидазы редьки Ход работы
- •11.3.2. Выделение пероксидазы капусты Ход работы
- •Ход работы
- •Контрольные вопросы
- •Ход работы
- •Рекомендации к составлению протокола
- •12.2. Количественное определение активности амилазы по приросту мальтозы
- •Ход работы
- •12.2. Определение активности уреазы
- •Ход работы
- •12.3. Определение активности сахаразы
- •Ход работы
- •12.4. Определение активности каталазы
- •12.4.1. Определение активности каталазы в муке
- •12.4.2. Определение активности каталазы в картофеле
- •Контрольные вопросы
- •Теоретические основы занятия
- •13.1. Термолабильность α -амилазы слюны
- •Ход работы
- •13.2. Действие амилазы на сырой и вареный крахмал
- •Ход работы
- •13.3. Определение оптимальной температуры действия ферментов
- •Ход работы
- •13.4. Установление термолабильности уреазы
- •Ход работы
- •13.5. Влияние температуры на активность пепсина
- •Ход работы
- •13.6. Влияние температуры на смещение химичесокого равновесия Ход работы
- •Знаете ли вы что
- •Контрольные вопросы
- •Активарование и ингибирование ферментов
- •Теоретические основы занятия
- •14.1. Активирование и ингибирование амилазы слюны
- •Ход работы
- •14.2. Ингибирующее действие ионов на дегидрогеназный комплекс картофеля Ход работы
- •14.3. Влияние желчи на активность липазы
- •Ход работы
- •14.4. Влияние электролитов на активность амилазы Ход работы
- •14.5. Определение влияния различных веществ на активность каталазы
- •Ход работы
- •14.6. Белки как противоядие для ионов тяжелых металлов
- •Ход работы
- •14.7. Воздействие формальдегида на активность амилазы
- •Ход работы
- •Контрольные вопросы
- •Теоретические основы занятия
- •15.1. Влияние рН на активность трипсина
- •Ход работы
- •15.2. Зависимость ферментативной активности амилазы слюны от рН реакции среды
- •Ход работы
- •Рекомендации к составлению протокола
- •15.3. Влияние рН на активность амилазы солода Ход работы
- •Рекомендации к составлению протокола
- •15.4. Влияние рн среды на активность каталазы Ход работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №16.
- •16.2. Специфичность действия амилазы
- •Ход работы
- •16.3. Специфичность действия сахаразы
- •Ход работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа № 17. Реакции на открытие моносахаридов. Свойства углеводов
- •Теоретические основы занятия
- •17.1. Реакция «серебряного зеркала»
- •Ход работы
- •17.4. Проба бенедикта на глюкозу
- •Ход работы
- •17.5. Реакция молиша
- •Ход работы
- •17.6. Цветная реакция с ванилином на фруктозу
- •17.10. Проба гайнеса
- •17.12.2. Реакция с соляной кислотой
- •17.13. Взаимодействие сахаров со щелочами
- •Ход работы
- •17.14. Окисление альдозы и кетозы йодом Ход работы
- •17.15. Действие на углеводы реактива фелинга
- •Лабораторная работа №18. Реакции на открытие олигосахаридов. Свойства углеводов
- •Теоретические основы занятия
- •18.9. Определение дисахаридов аммиачным раствором оксида серебра
- •Ход работы
- •18.10. Гидролиз сахарозы
- •Ход работы
- •18.11. Изменение сахара при нагревании Ход работы
- •18.12. Получение искусственного меда
- •Ход работы
- •18.13. Исследование меда
- •Ход работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №19. Реакции на открытие полисахаридов. Свойства углеводов
- •Теоретические основы занятия
- •19.1. Выделение крахмала
- •Ход работы
- •19.2. Реакция полисахаридов с йодом
- •Ход работы
- •19.3. Действие на полисахариды реактива фелинга
- •Ход работы
- •19.4. Реакции с крахмальным клейстером Ход работы
- •19.5. Образование декстрина и его реакции
- •Ход работы
- •19.6. Растворение целлюлозы в медноаммиачном растворе
- •Ход работы
- •19.7. Получение коллодия
- •Ход работы
- •19.10. Гидролиз клетчатки до глюкозы
- •Ход работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №20. Методы количественного определения углеводов
- •Теоретические основы занятия
- •20.1. Хроматографический анализ углеводов
- •Ход работы
- •20.2. Йодометрический метод определения лактозы
- •Ход работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №21. Определение редуцирующих сахаров в растительном материале
- •Теоретические основы занятия
- •21.1. Приготовление вытяжки Ход работы
- •21.2. Определение редуцирующих сахаров по лэну и эйнону
- •Ход работы
- •21.3. Определение сахарозы
- •Ход работы
- •21.4. Определение титра реактива фелинга
- •Ход работы
- •Контрольные вопросы
- •Лабораторная работа №22. Получение и исследование свойств пектиновых веществ
- •Теоретические основы занятия
- •22.1.Выделение растворимого пектина Ход работы
- •22.2. Качественное обнаружение пектиновых веществ (реакция эрлиха) Ход работы
- •22.3. Экстракция пектина Ход работы
- •22.4. Приготовление пектиновой кислоты Ход работы
- •22.5. Приготовление пектиновой кислоты промыванием минеральной кислотой Ход работы
- •23.1. Выделение гликогена из дрожжей
- •Ход работы
- •Расчёт результатов
- •Лабораторная работа №24. Определение липидов и изучение их свойств
- •Теоретические основы занятия
- •Техника безопасности
- •24.1. Метод тонкослойной хроматографии
- •Ход работы
- •24.2.Определение массовой доли свободно извлекаемого жира
- •Ход работы
- •24.3. Определение нелипидных примесей Ход работы
- •24.4. Жировые эмульсии
- •24.4.1.Оценка эмульгирующей способности эмульгатора
- •Ход работы
- •24.4.2. Оценка стабильности жировой эмульсии
- •Ход работы
- •24.5. Растворение и эмульгирование жиров
- •Ход работы
- •24.6. Исследование действия эмульгаторов
- •Ход работы
- •24.7. Плавление и затвердевание жиров
- •Ход работы
- •25.3.2. Реакция сальковского
- •25.3.3. Реакция либерманна—бурхардта
- •25.4. Качественная реакция выявления кетоновых тел в молоке
- •Ход работы
- •Ход работы
- •25.7. Обнаружение стеролов в растительном масле Ход работы
- •25.8. Демонстрация кислых свойств жирних кислот
- •Ход работы
- •25.9. Определение холинсодержащих фосфолипидов в смеси липидов
- •26.1. Получение натриевого твердого мыла
- •26.1.1. Получение мыла из жира Ход работы
- •26.1.2. Получение мыла из стеарина
- •26.1.3. Получение мыла из воска
- •26.2. Получение калиевого жидкого мыла
- •26.3. Определение содержания жирных кислот в твердом мыле
- •26.4. Определение содержания жирных кислот в жидком мыле
- •26.8. Моющее действие мыла
- •Ход работы
- •26.9. Действие жесткой воды на мыло
- •Ход работы
- •26.12. Стеариновая кислота — кислота слабая
- •Ход работы
- •Контрольные вопросы
- •27.1. Количественная оценка степени ненасыщенности липидов по йодному числу
- •Ход работы
- •27.2. Количественное определение перекисного числа
- •Ход работы
- •27.3. Определение кислотного числа
- •Ход работы
- •27.4. Определение эфирного числа
- •27.5. Определение содержания кислот в жирах
- •Ход работы
- •27.9. Обнаружение перекисных соединений
- •Ход работы
- •Контрольные вопросы
- •Приложение
- •Водородный показатель некоторых биологических жидкостей
- •Rf аминокислот для идентификации хроматографией в бутилово-уксусно-водной смеси 4:1:5
- •Термины, различающиеся по смыслу, но сходные по звучанию
- •Литература Основная
- •Интернет-источники
10.1.1.Определение витамина с в шиповнике или хвое Ход работы
Сухую хвою или шиповник (0,5 г) тщательно растирают в фарфоровой ступке с 2 мл раствора соляной кислоты, перемешивают и осторожно, без потерь (на палочке), через воронку переносят содержимое ступки в мерную колбу емкостью 50 мл. Ступку и пестик обмывают раствором соляной кислоты, и промывную жидкость присоединяют к общей порции вытяжки. Объем жидкости в мерной колбе доводят дистиллированной водой до метки, колбу закрывают пробкой и содержимое ее несколько раз перемешивают. Небольшую порцию вытяжки отфильтровывают через бумажный фильтр (фильтрат используют для титрования). В две колбочки емкостью 50 мл отмеривают по 2 мл вытяжки из шиповника или по 10мл вытяжки из хвои (к вытяжке из шиповника добавляют 8 мл раствора соляной кислоты). Содержимое колбочек титруют раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола до появления розового окрашивания, не исчезающего в течение 30 с. Рассчитывают содержание аскорбиновой кислоты.
10.1.2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ВИТАМИНА С В КАРТОФЕЛЕ
Ход работы
Картофель (5 г) измельчают и растирают в фарфоровой ступке, приливая постепенно 1 мл соляной кислоты и 15 мл дистиллированной воды. Полученную массу сливают в коническую колбочку. Ступку ополаскивают водой и сливают по стеклянной палочке в колбу. Титруют раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола. Рассчитывают содержание аскорбиновой кислоты.
10.1.3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ВИТАМИНА С В КАПУСТЕ
Ход работы
Взвешивают 1 г капусты, растирают в ступке с 2 мл соляной кислоты, приливают 8 мл воды и отфильтровывают. Для титрования отмеряют 2 мл фильтрата, добавляют 10 капель соляной кислоты и титруют раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола до появления розовой окраски. Рассчитывают содержание аскорбиновой кислоты.
10.1.4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ВИТАМИНА С В МОЛОКЕ
Ход работы
К 10 мл молока добавляют 10 капель соляной кислоты и 10 мл воды. Титруют раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола до появления розовой окраски. Рассчитывают содержание аскорбиновой кислоты.
10.1.5. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ВИТАМИНА С В ЛУКЕ
Ход работы
Лук (0,5 г) растирают в ступке с 2 мл соляной кислоты и 20 мл воды. Отфильтровывают и титруют раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола до появления розовой окраски. Рассчитывают содержание аскорбиновой кислоты.
10.2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ УСТОЙЧИВОСТИ ВИТАМИНА С В РАЗНЫХ УСЛОВИЯХ
Витамин С легко разрушается при нагревании. Для определения устойчивости витамина С наблюдают результаты действия высокой температуры на него в присутствии различных веществ.
Ход работы
В три колбочки наливают по 5 мл настойки шиповника (или по 10 мл настойки хвои). Потом доливают: в первую колбочку 5 мл 1М НСl, во вторую - 10 капель 3% Н2О2, в третью - 0,5 мл 10% раствора CuSO4. Все колбочки кипятят на электрической плитке в течение 2-3 минут. После охлаждения во все три колбочки доливают по 5 мл 1М раствора НСl и по 20 капель крахмала. Титруют каждую пробу раствором йода (Сн=0,01 моль) до стойкого, не исчезающего в течение 30 секунд синего цвета. Сравнивают цифры титрования после нагревания в разных условиях с исходными цифрами титрования настойки шиповника или хвои.
Делают выводы, при каких условиях витамин С сохраняется в наибольшей степени. Полученные результаты записывают в виде таблицы 16.
Таблица 16 - Устойчивость витамина С при нагревании в разных условиях
Объем в мл 0,01М раствора йода, пошедшего на титрование |
Условия нагревания |
||
НСl |
Н2О2 |
CuSO4 |
|
|
|
|
|
Выводы: |
|
|
|