7.6.1. Хроматографическое разделение растительных пигментов на бумаге

Метод распределительной хроматографии смесей, состоящих из нескольких близких по строению и свойствам веществ, основан на явлении адсорбции. Разделение таких веществ основано на неодинаковом коэффициенте распределения каждого из них. Каждое вещество, обладая характерным коэффициентом распределения, продвигаясь вместе с растворителем через слой адсорбента, адсорбируется на разной высоте этого слоя – происходит разделение смеси веществ.

Ход работы

Берут 2 г мелко измельченных свежих листьев, помещают их в фарфоровую ступку и добавляют небольшое количество стеклянного песка и щепотку мела (для нейтрализации органических кислот, находящихся в растительном соке). К полученной смеси небольшими порциями добавляют 10 мл ацетона, непрерывно растирая содержимое ступки. Когда в ступке образуется однородная масса, ее фильтруют через бумажный фильтр в химический стакан. В отфильтрованный ацетоновый экстракт из листьев опускают на 2-3 мм полосу фильтровальной бумаги размером 4х25 мм, укрепленную при помощи зажима на стеклянной палочке. Полоска бумаги не должна касаться стенок стакана. Спустя 20-30 мин наблюдают зональное разделение разноокрашенных растительных пигментов на полосе фильтровальной бумаги.

7.6.2. Разделение пигментов листа (по краусу)

Для разделения пигментов используют разную растворимость пигментов листа в спирте и бензине.

Ход работы

Для получения вытяжки пигментов листа можно использовать сухой и сырой материал. Истертые в порошок сухие листья настаивают на спирте (для ускорения извлечения следует поставить колбочку с извлекаемым материалом в кипящую воду). Темно-зеленый экстракт фильтруют через бумажный сухой фильтр. При извлечении пигментов из свежего материала листья мелко нарезают ножницами, помещают в фарфоровую ступку и растирают пестиком с небольшим количеством спирта. После растирания прибавляют несколько миллилитров спирта и экстракт фильтруют.

В пробирку наливают 3-5 мл спиртовой вытяжки, прибавляют несколько большее по объему количество высококачественного бензина и несколько раз энергично встряхивают, закрыв пробирку пробкой. В результате встряхивания происходит разделение пигментов: в верхний, бензиновый слой перейдут два зеленых пигмента и каротин, а в нижнем, спиртовом слое останется ксантофилл. Если после встряхивания слои полностью не разделяются, необходимо прибавить несколько капель воды (осторожно по каплям), чтобы разбавить спирт и обусловить его несмешиваемость с бензином.

7.6.3. Исследование химических свойств хлорофилла

По своей химической природе хлорофилл – сложный эфир. В центре молекулы находится Мg, который может связываться с азотом четырех пиррольных колец. Зеленый цвет хлорофилла зависит от наличия магния в его молекуле. Связь Мg с ядром частицы хлорофилла очень непрочна: Мg легко замещается атомом водорода даже при воздействии слабой кислотой. Побурение листьев (при отмирании от мороза или при кипячении) зависит от воздействия на хлорофилл кислот клеточного сока.