Ход работы

10 мл молока разбавляют равным количеством дистиллированной воды и осаждают казеин 10 каплями 10% раствора уксусной кислоты. Реакцию среды определяют на рН-метре или с помощью индикаторной бумаги. Выделившийся в виде хлопьев казеин отфильтровывают и промывают на фильтре дистиллированной водой 2-3 раза. Небольшие порции осадка снимают с фильтра шпателем и проделывают цветную реакцию на белок (биуретовую).

7.5.2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФОСФОРНОЙ КИСЛОТЫ В КАЗЕИНЕ

К 1 мл раствора казеина добавляют 2 мл раствора молибдата аммония в азотной кислоте. Смесь слегка нагревают. Образуется осадок фосфорномолибденовокислого аммония (NH₄)₃PO₄·12MoO₃.

7.5.3. ПРОБА НА ПОЛИПЕПТИДНЫЙ КОМПОНЕНТ КАЗЕИНА

Проба на полипептидный компонент казеина проводится по биуретовой реакции. В пробирку с исследуемым веществом добавляют по 2 мл раствора гидроксида натрия 10 % и по 3-4 капель раствора с массовой долей сульфата меди 1 %. Содержимое пробирки перемешивают встряхиванием и оставляют при комнатной температуре на 10 минут для развития окраски.

7.5.4. ГИДРОЛИЗ КАЗЕИНА И ОТКРЫТИЕ ЕГО СОСТАВНЫХ ЧАСТЕЙ

При щелочном гидролизе казеин распадается на белок и фосфорную кислоту. Белок открывают биуретовой реакцией, а фосфорную кислоту молибденовой пробой.

Ход работы

К 100 мг сухого измельченного казеина прибавляют 5 мл 10% натра и помещают в кипящую водяную баню на 30 минут, помешивая время от времени содержимое пробирки.

После охлаждения к 10 каплям гидролизата прибавляют 5 капель 10% раствора гидроксида натрия и по каплям 1% раствор сернокислой меди до появления красно-фиолетового или сине-фиолетового окрашивания. Положительная биуретовая реакция доказывает белковую природу казеина.

Для открытия фосфорной кислоты к 20 каплям гидролизата прибавляют 10 капель 25% азотной кислоты (до кислой реакции) и 10 капель раствора молибденовокислого аммония в азотной кислоте. Оставляют стоять на 5 минут.

Образующийся осадок белка и высокомолекулярных продуктов неполного гидролиза белков отфильтровывают с помощью бумажного фильтра.

К фильтрату, содержащему фосфорномолибденовокислый аммоний прибавляют 10 капель 2% раствора гидрохинона и оставляют стоять на 5 минут.

К содержимому пробирки добавляют 20 капель раствора сульфита натрия медленно, по каплям, во избежание сильного образования пены. В присутствии фосфорной кислоты постепенно развивается синее окрашивание раствора.

7.6. Исследование химического состава хромопротеидов

Биологические пигменты – окрашенные вещества, содержащиеся в тканях животных и растений. Химическая природа и биологическая роль пигментов различны. Обширную группу пигментов составляют хромопротеиды – сложные белки, содержащие окрашенные простетическае группы. К ним относится красный гемоглобин, принимающий участие в переносе кислорода; зеленый хлорофилл, принимающий участие в осуществлении процессов фотосинтеза.

Красные водоросли обязаны своей окраской пигменту фикоэритрину, который подобно хлорофиллу, активно участвует в фотосинтезе. К растительным пигментам относятся также антоцианины, обеспечивающие образование розовой, красной, синей и фиолетовой окраски цветов и плодов, а также флавоны, окрашивающие растительные ткани в желтые цвета.