Ход работы

Исследуемый раствор и "метчик" наносят на пластинку "Силуфол" каплями, пользуясь микропипеткой. Пробу наносят осторожно, не нарушая слой сорбента.

Располагают капли на одной линии так, чтобы расстояние между ними, а также от нижнего и бокового краев было не менее 10 мм.

Пластинку помещают в герметически закрывающуюся камеру, куда предварительно (за 2 часа) заливают насыщенный водой фенол или верхний слой смеси бутанол - уксусная кислота - вода, взятых в соотношении 4:1:5.

Нижний край пластинки должен быть погружен в жидкость на 5 мм. Пластинка должна находиться в камере в течение 50-60 минут. За это время растворитель поднимется на высоту 80-100 мм. После этого пластинку пинцетом вынимают из камеры, высушивают от растворителя на воздухе, отмечают линию финиша и опрыскивают 0,1% раствором нингидрина в ацетоне. Для проявления пятен пластинки помещают на 10 минут в сушильный шкаф при температуре 110 С. При этом, на ней появляются фиолетовые пятна аминокислот.

R_f для аминокислот при разделении на бумаге растворителем, состоящим из бутанола, уксусной кислоты и воды в соотношении 12:3:5 приведены в таблице 9.

Таблица 9 - Коэффициенты подвижности аминокислот (R_f)

Аминокислоты	Rf	Аминокислоты	Rf	Аминокислоты	Rf
Цистеин	0,08	Оксипролин	0,22	Тирозин	0,45
Гистидин	0,11	Глицин	0,23	Триптофан	0,50
Лизин	0,12	Аспарагиновая	0,23	Метионин	0,50
Аспарагин	0,12	Треонин	0,26	Валин	0,51
Глутамин	0,17	Глутаминовая	0,28	Фенилаланин	0,60
Аргинин	0,15	Аланин	0,30	Изолейцин	0,67
Серин	0,22	Пролин	0,34	Лейцин	0,70

Сопоставляя положение пятен "метчиков", определяют наличие тех или иных аминокислот в исследуемой смеси. Определяют R_f аминокислот и сравнивают с табличными данными. Зарисовать хроматограммы и подписать пятна аминокислот.

5.4. Выделение белков из природных материалов

5.4.1. Выделение яичного альбумина

Яичный белок представляет собой смесь нескольких белков. Примерно 70% яичного белка составляет альбумин, который легко отделяется от глобулинов. При десятикратном разведении яичного белка дистиллированной водой глобулины выпадают в осадок, а альбумин остается в растворе.

Ход работы

Чтобы отделить белок от желтка, осторожно проделывают отверстия в скорлупе яйца с двух концов и выливают белок в стакан емкостью 500 мл, затем в стакан добавляют 250 мл дистиллированной воды и содержимое тщательно перемешивают стеклянной палочкой с резиновым наконечником. Раствор переносят в мерный цилиндр и объем доводят дистиллированной водой до 300 мл. Раствор оставляют на несколько минут при комнатной температуре для образования хлопьевидного осадка глобулинов.