3.5.2.3. Открытие промежуточных продуктов распада белка в гидролизате при помощи биуретовой реакции
В пробирку наливают 5 капель гидролизата белка и нейтрализуют 10% раствором щелочи по красному лакмусу (опускают кусочек лакмуса в пробирку и помешивают стеклянной палочкой). После нейтрализации гидролизата (при посинении лакмуса) проводят биуретовую реакцию, прибавляя 2 капли CuSO4. Появляется фиолетово-розовое окрашивание. При полном гидролизе белка до аминокислот (приблизительно 2-3 ч) биуретовая реакция с гидролизатом отрицательная (голубое окрашивание). Результаты внести в таблицу 5.
Таблица 5 - Результаты титрования
Проба |
NaOH 0,005 н (мл) |
Азот -аминогрупп (мг) |
Белок до гидролиза |
|
|
Гидролизат |
|
|
3.6. Определение содержание глицина
Используют формоловой смесь, которая готовится следующим образом: смешивают 50 мл 40% формалина с 2 мл 0,5% фенолфталеина, полученную смесь титруют 0,2 н. Смесь готовят каждые 2-3 дня, после приготовления смесь фильтруют.
Ход работы
Отмерить 3 мл глицина, добавить 1-2 капли фенолфталеина и 0,1 н раствора гидроксида натрия до появления розовой окраски. Затем в нейтральный раствор глицина отмерить пипеткой 2 мл формоловой смеси - красная окраска раствора исчезнет.
Титровать 0,1 и раствором гидроксида натрия до появлении розовой окраски, затем добавить еще 4 капли щелочи. Отметить количество 0,1 н щелочи, израсходованной на титрование и произвести вычисление.
Расчет: 1 мл 0,1 н щелочи соответствует 1,4 мг азота. Умножив количество миллилитров 0,1 н раствора щелочи, пошедшей на титрование на 1,4, узнаем количество аминного азота в миллиграммах в 3 мл раствора глицина (а, мг). По количеству азота находим количество кислоты, исходя из того, что в молекуле глицина 1 атом азота. Mr= CH2NH2COOH =75 N=14 75·14=х·а
После того, рассчитав на 100 мл раствора, узнаем процентное содержание глицина.
3.7. Определение содержания белка и казеина в молоке формольным методом
Метод основан на том, что водный нейтральный раствор аминокислот в присутствии нейтрального формалина способен повышать кислотность с образованием соединений, в которых оба водорода аминогруппы замещены метильной группой. Свободную группу COOH оттитровывают щелочью:
Ход работы
В колбу объемом от 50 до 100 мл отмерить пипеткой 10 мл цельного молока, добавить 10 капель 1 %-ного спиртового раствора фенолфталеина, все размешать и оттитровать 0,1 н раствором щелочи до слабо-розового окрашивания, не исчезающего при взбалтывании.
В колбу добавить 2 мл нейтрализованного формалина (приготовление: к 50 мл 30 %-ного формалина добавить 0,5 мл 1 %-ного спиртового раствора фенолфталеина и при перемешивании оттитровать 1 н раствором NaOH до слабо-розового окрашивания), размешать (слабо-розовое окрашивание исчезнет).
В бюретке отметить уровень щелочи и содержимое колбы вновь оттитровать до такого же слабо-розового окрашивания (как в первый раз), не исчезающего при размешивании.
Сделать отсчет по бюретке, показывающий количество 0,1 н раствора щелочи, пошедшей на титрование смеси в колбе, и рассчитать содержание общего белка и казеина в молоке.
Для установления содержания общего белка необходимо количество 0,1 н раствора щелочи, пошедшее на титрование после добавления формалина, умножить на коэффициент 1,94, а для определения казеина – на коэффициент 1,51.
ПРИМЕР РАСЧЕТА. После добавления формалина на титрование содержимого колбы пошло 1,7 мл 0,1 н раствора NaOH.
Содержание общего белка в молоке (%):
1,7×1,94=3,3.
Содержание казеина (%):
1,7×1,51=2,57.
Факторы, влияющие на точность анализа:
а) неодинаковая интенсивность окраски при титровании до добавления формалина;
б) качество формалина. Используйте только нейтральный и свежеприготовленный формалин!