Ход работы

В мерную колбу на 25 мл берут 2 мл исследуемого раствора 1% глицина, добавляют 2 капли тимолфталеина и по каплям 0,5 н раствор гидроксида натрия до слабо-голубого окрашивания. После этого добавляют 10 мл суспензии фосфата меди, хорошо перемешивают. При исчезновении осадка следует добавить еще 5 мл суспензии. Раствор в колбе доводят до метки водой, тщательно перемешивают многократным переворачиванием колбы и отфильтровывают избыток фосфата меди через плотный фильтр. Фильтрат должен быть прозрачным. Берут две пробы по 10 мл в конические колбы для титрования, подкисляют 0,4 мл концентрированной уксусной кислоты, добавляют 6 мл 10 % раствора йодида калия и выделившийся йод титруют 0,01 н раствором гипосульфита. Крахмал 1-2 мл на 100 мл раствора добавляют в тот момент, когда титруемый раствор примет соломенно-желтую окраску. Титрование продолжают до исчезновения появившейся после добавления раствора крахмала синей окраски.

Ставят контрольное определение, в котором вместо глицина берут такой же объем воды. Количество гипосульфита, затрачиваемое на контрольный раствор, вычитают из такового в опыте.

Химизм процесса при определении аминного азота медным способом сводится к следующему. При взаимодействии натриевой соли глицина или других аминокислот с суспензией фосфата меди образуется окрашенная в синий цвет хорошо растворимая комплексная медная соль глицина либо иных аминокислот:

Фосфорная кислота связывается боратным буфером, и реакция идет до конца. В фильтрате после отделения избытка фосфата меди оказываются лишь медные соли аминокислот (за исключением цистина, медная соль которого нерастворима), и, следовательно, по количеству меди, перешедшей в фильтрат, можно определить содержание аминокислот.

Уксусная кислота при добавлении к фильтрату вытесняет из медной соли более слабую аминокислоту:

(H₂N-CH₂-COO)₂Cu+2CH₃COOH  2 H₂N-CH₂-COOH+(CH₃-COO)₂Cu

При действии йодоводородной кислоты, образовавшейся из йодида калия в кислой среде, ион меди в степени окисления +2 восстанавливается. Образуется нерастворимый йодид меди (I) и свободный йод:

2(CH₃-COO)₂Cu+4HI  2CuI+4 CH₃-COOH+I₂

Т.к. йодид меди (I) нерастворимый в слабокислой среде, то процесс идет до конца. Поэтому количество выделившегося йода эквивалентно количеству медных солей аминокислот. Концентрацию свободного йода определяют титрованием:

2 Nа₂S₂О₃+I₂  2 Nа I+ Nа₂S₄О₆

По уравнению реакции 0,5 моль выделившегося йода соответствует 1 моль меди, который в свою очередь эквивалентен 28 г аминного азота. С другой стороны 0,5 моль йода реагирует с 1 эквивалентом гипосульфита, что соответствует 28 г аминного азота. Отсюда 1 мл 0,01 н раствора гипосульфита соответствует 0,28 г аминного азота. Умножением величин 0,28 мл на затраченный объем 0,01 н раствора гипосульфита минус контроль получаем число мг аминного азота во взятом объеме (10 мл) испытуемого раствора. После этого делается пересчет на весь объем раствора и сравнивается с массой аминного азота с тем, который должен быть в 2 мл исследуемого раствора глицина.