Системы микроскопии

сухая иммерсионная

-между объектом и объективом - между объектом и объективом-

находится воздух; жидкость (масло, вода);

- используется для изучения крупных - используется для изучения

биологических объектов (ботанических, микроорганизмов;

гистологических);

- максимальное увеличение объектива 40 - увеличение объектива 90;

Преимущества иммерсионной системы

1. Большее увеличение (увеличивает в 90 раз вместо 40 в сухой системе микроскопии)

2. Лучшая освещенность за счет создания однородной среды для прохождения лучей света с помощью иммерсионного масла

- Фазово-контрастное устройство может быть установлено на любом микроскопе. Фазово-контрастная микроскопия основана на явлении интерференции света, прошедшего и не прошедшего через объект, и позволяет наблюдать прозрачные объекты, отличающие­ся от окружающей среды (или других структур клетки) по показателю преломления или по толщине и вызывающие изменение фазы прошедшего через них света. Благодаря специ­альному приспособлению в объективе (фазовая пластинка) и в конденсоре (кольцевая диафрагма) эти объекты выглядят более темными (позитивный фазовый контраст) или более светлыми (негативный фазовый контраст) по сравнению с окружающей средой.

- Темнопольная микроскопия (ультрамикроскопия) основана на явлении светорас­сеивания. При темнопольной микроскопии в объектив попадают только лучи, рассеянные объектом, и не попадают прямые лучи от осветителя. Поэтому наблюдаемые микроорга­низмы кажутся ярко светящимися на темном фоне.

Темнопольную микроскопию применяют для прижизненного изучения лептоспир, спиро­хет, а также микроорганизмов слишком мелких, чтобы их можно было различить при обычном светлопольном освещении. Для темнопольной микроскопии используют обыч­ные объективы и специальные темнопольные конденсоры.

- Люминесцентная микроскопия основана на использовании явления флюоресцен­ции. Применяют специальные люминесцентные микроскопы или приспособления к обыч­ным микроскопам. Так как большинство микроорганизмов не обладает собственной люминесценцией, то их предварительно окрашивают (флюорохромируют) сильно разве­денными растворами специальных красителей (флюорохромы), которые связываются с определенными структурами клетки.

Люминесцентную микроскопию применяют также для выявления антигенов и антител. С этой целью используют метод иммунофлюоресценции (люминесцентно-серологический метод). Этот метод позволяет выявить в препарате микробы, содержащие определенные антигены. Для их обнаружения необходимо иметь антисыворотки, содержащие антитела к этим антигенам (к антисывороткам химическим путем присоединены молекулы флюоро-хромов - люминесцирующие сыворотки). На фиксированный препарат во влажной камере наносят люминесцирующую сыворотку, инкубируют, промывают раствором хлорида натрия, высушивают и рассматривают в люминесцентном микроскопе. Если в препарате есть микробы, содержащие антиген, антитела к которому были в люминесцирующей сыворотке, они ярко светятся. Остальные микробы не люминесцируют.

- Электронная микроскопия. Изображение в электронном микроскопе образуется не с помощью световых лучей и стеклянных линз, а с помощью потока электронов, который фокусируется электрическим или магнитным полем. Разрешающая способность примерно в 2000 раз больше, чем светового (0,2 мкм), и с его помощью можно увидеть даже крупные молеку­лы. Применение электронного микроскопа значительно расширило знания о вирусах, фагах и других микроорганизмах.

ЗАНЯТИЯЕ 1.1.2

Морфология прокариот. Методы выявления: окраска, микроскопия

Цель занятия:

изучить морфологию прокариот; особенности ультраструктуры бактерий, функции отдельных структур; ознакомиться с методами приготовления и окраски микропрепаратов.

Студент должен знать:

1. Основные формы и размеры бактерий.

2. Постоянные и непостоянные структуры бактериальной клетки.

Функциональное значение отдельных структурных компонентов.

3. Различия в структуре грамположительных и грамотрицательных бактерий.

Химический состав. Функции.

4. Протопласты, сферопласты и L-формы бактерий.

5. Механизмы взаимодействия красителей с клеточной стенкой бактерий в

окраске по Граму.

6. Методы изучения микроорганизмов в нативном и окрашенном состоянии.

Простые и сложные методы окрашивания. Методы Грама, Циля-Нильсена,

Ожешко, Нейссера, Бурри-Гинса, Романовского-Гимза.

Студент должен уметь:

• приготовить нативные и фиксированные препараты

• окрасить препараты простым методом и методом Грама.

Студент должен иметь представление:

• о механизмах окраски структурных компонентов бактерий: клеточной стенки кислотоустойчивых бактерий, спор, капсул, жгутиков, включений.

• Работа № 1. Морфология прокариот

Цель: сравнить формы и размеры микроорганизмов на примере кишечной палочки, стафилококка и гриба Candida spp. (см. теоретическую справку).

Самостоятельная работа: микроскопировать готовые препараты-мазки, зарисовать и описать.

Результат:

E. coli

Результат:

S. aureus

Результат:

Candida spp.

Вывод:

Работа № 2. Изучение строения бактериальной клетки и структуры клеточной стенки

Цель: изучить строение бактериальной клетки и структуру клеточной стенки бактерий; освоить технику приготовления фиксированных препаратов.

Самостоятельная работа: приготовить мазок из смеси культур стафилококка и кишечной палочки и окрасить по Граму (см. теоретическую справку). Оценить морфологические и тинкториальные свойства.