Техника посева на жидкие и плотные питательные среды
Методы, основанные на механическом разобщении микробов
Метод Дригальского
С
терильной
пипеткой материал помещают на поверхность
МПА в чашку Петри
посев шпателем (газоном) посев петлей (штрихом)
Стерильным шпателем материал Чашку Петри с МПА делят на
тщательно распределяют по 4 сектора. Исследуемый мате-
поверхности агара. Затем, не беря риал стерильной петлей вносят
нового материала и, не обжигая в 1 сектор и делают штрихи,
шпатель, делают посев на 2 и 3 затем такие же линии проводят
чашку МПА. и на других секторах.
На последних секторах вырастают
отдельные колонии.
1
2 3 1
2
изолированные колонии 4 3
4 сектор - изолированные колонии
С
нижение
концентрации микробов
Метод седиментации по Коху - основан на свободном оседании микроорганизмов на питательную среду в чашку Петри из воздуха. Применяется для определения загрязненности воздуха микрооргагнизмами.
Метод укола - применяется для выращивания анаэробов или выявления характерного признака микроба, т.к. рост по ходу укола типичен для рада бактерий. Также применяется для длительного хранения культур.
Посев на скошенный агар – применяется для накопления биомассы, получения чистой культуры и их хранения.
Методы, основанные на биологических свойствах микроорганизмов
■ Метод Шукевича
Техника посева. Исследуемый материал засевают в конденсационную воду скошенного агара. При размножении подвижные формы микробов из конденсационной воды дают «ползущий» рост по скошенному агару. Для получения чистой культуры ее отсевают с верхнего края посева.
■ Метод прогревания. Позволяет отделить спорообразующие бациллы от не споровых форм. Прогревают исследуемый материал на водяной бане при 80°С 10-15 мин. Вегетативные формы погибают, а споры сохраняются и при посеве на соответствующую питательную среду прорастают.
■ Метод фильтрации основан на пропускании исследуемого материала через специальные фильтры с определенным диаметром пор и разделение содержащихся микроорганизмов по величине. Этот метод применяется для очистки вирусов от бактерий, а также при получении фагов и токсинов (в фильтрате - чистый фаг, очищенный токсин).
Работа № 5. Биохимическая активность аэробов (дифференциально-диагностические признаки)
Цель: изучить ферментативную активность микроорганизмов (см. теоретическую справку)
Самостоятельная работа: определить сахаролитическую и протеолитическую активность предложенной культуры и идентифицировать микроорганизм.
А) Сахаролитическая и протеолитическая активность
вид м/о
|
Сахаролитическая активность
|
Протеолитическая активность |
||||||
лактоза |
глюкоза |
мальтоза |
маннит |
сахароза |
индол |
Н2S |
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Вывод:
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Б) Каталазная активность аэробов
Цель: изучить каталазную активность микроорганизмов; определить тип дыхания исследуемой культуры (см. теоретическую справку)
Самостоятельная работа: определить каталазную активность у исследуемой культуры
Результат:
_______________________________
_________________________________________
_________________________________________
_________________________________________
Вывод: __________________________________________________________________
___________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
Теоретическая справка
Работа № 5
Б) Каталазная активность. Каталаза - это фермент, катализирующий реакцию разложения перекиси водорода с образованием воды и кислорода. Каталазу содержат аэробы и факультативные анаэробы, но она отсутствует у облигатных анаэробов. Обнаружить каталазу можно по пузырькам кислорода, которые начинают выделяться сразу же после смешивания микробных клеток с 1% раствором перекиси водорода. На предметное стекло помещают каплю перекиси водорода и суспендируют в ней небольшое количество культуры микроорганизмов, выращенной на плотной среде
Работа № 6. Схема бактериологического метода диагностики аэробных инфекций
Цель: освоить бактериологический метод диагностики (см. теоретическую справку)
Самостоятельная работа: прочитать теоретическую справку и разобрать схему выделения и идентификации микроорганизмов из биологического материала.
Теоретическая справка
Бактериологический метод является основным при диагностике инфекционных заболеваний. Его сущность заключается в определении вида возбудителя инфекции, следовательно, можно поставить этиологический (окончательный) диагноз. Основной недостаток метода – длительность исследования – от 3х до 5ти суток, а в отдельных случаях и более.
Успех проведения бактериологического метода во многом зависит от предварительного этапа, включающего забор исследуемого материала и его транспортировку, оформление направления в бактериологическую лабораторию. При этом необходимо соблюдать ряд правил:
Забор исследуемого материала следует провести до начала антибактериальной терапии или через 8-10 часов после введения последней дозы антибиотика. Чтобы избежать загрязнения пробы микрофлорой окружающей среды, необходимо соблюдать строжайшую антисептику. Для этого используют стерильный материал: а) ватные тампоны для взятия материала из раны, со слизистых оболочек (глаз, зева, носа); б) проволочную петлю для взятия материала из влагалища, анального отверстия; в) шприц для взятия крови, гноя; г) стерильную посуду для непосредственного сбора в нее мочи, мокроты, испражнений.
Транспортировку полученного материала следует проводить в максимально короткие сроки (2-3 часа) в специальных биксах или пеналах.
Направление прилагают к клиническому образцу в качестве сопроводительного документа. Оно содержит основные сведения, необходимые для проведения микробиологического исследования:
- фамилия, имя, отчество, возраст пациента;
- предполагаемый диагноз заболевания;
- предшествующая антимикробная терапия;
- характер материала;
- дата и время взятия материала;
- цель исследования;
- название лечебного учреждения, номер отделения, палаты;
- подпись лечащего врача.
Бактериологический метод осуществляется в два этапа.
Выделение чистой культуры возбудителя (1-2 суток).
Идентификация чистой культуры (1-3 суток).
На первом этапе проводится посев исследуемого материала на твердую или жидкую питательную среду, оценка культуральных свойств, отбор подозрительных колоний и их отсев на скошенный агар. Этап идентификации включает обязательное изучение морфологии, биохимических свойств и антигенной структуры выделенной чистой культуры, а также проведение дополнительных исследований по определению антибиотикочувствительности, фагочувствительности, фаготипирования, изучение патогенности и персистентных свойств.
Схема бактериологического метода диагностики аэробных инфекций
1
этап
2
этап