- •Правила организации и оборудования микробиологической лаборатории (техника безопасности). Морфология эукариотов (грибы)
- •Оборудование рабочего места бактериолога На рабочем столе должно быть все необходимое для работы:
- •Внимательно прочитать!
- •За несоблюдение правил охраны труда и пожарной безопасности студент отстраняется от занятия!
- •Убавить яркость лампы до минимума вращением рукоятки регулирования яркости горения!
- •Выключить лампу, установив выключатель микроскопа в положение «0».
- •Морфологические особенности грибов
- •Морфология грибов и методы их изучения
- •Методы изучения
- •Типы микроскопов и принципы микроскопии; правила работы с микроскопом при использовании иммерсионной системы
- •Световой микроскоп состоит из:
- •Системы микроскопии
- •Р езультат:
- •Структурные компоненты бактериальной клетки, их функции методы выявления:
- •Техника приготовления препаратов-мазков, их фиксация и окраска
- •Методы фиксации
- •Методы окраски
- •Исследование микроорганизмов в живом состоянии для изучения форм и подвижности. Техника приготовления препаратов «висячая» и «раздавленная» капли
- •Сравнительная характеристика эукариотической и прокариотической клетки
- •Основные формы бактерий
- •Классификация патогенных микроорганизмов
- •Методы выявления актиномицет
- •Методы выявления спирохет (трепонем, боррелий, лептоспир)
- •Методы выявления микоплазм
- •Хламидии (морфология, жизненный цикл хламидий).
- •Методы выявления хламидий
- •Методы выявления риккетсий
- •Взаимодействие бактериофага с оболочкой бактерии
- •Питательные среды (состав некоторых питательных сред)
- •Дифференциально-диагностические среды.
- •1. Пс для культивирования и изучения биохимических свойств.
- •2. Коммерческие наборы – для изучения биохимических свойств (определение набора ферментов микроорганизмов для их идентификации).
- •4. Пс для изучения сахаролитических свойств:
- •5. Пс для изучения протеолитических свойств:
- •Техника посева на жидкие и плотные питательные среды
- •Метод Дригальского
- •Методы, основанные на биологических свойствах микроорганизмов
- •Работа № 5. Биохимическая активность аэробов (дифференциально-диагностические признаки)
- •3 Этап
- •4 Этап
- •1) Что изображено на схеме?
- •1)Куриный эмбрион
- •2) Культура тканей
- •3) Лабораторные животные
- •Физические методы. Методы основаны на выращивании микроорганизмов в среде без воздуха
- •Химические методы основаны на поглощении кислорода воздуха в герметически закрытом сосуде (анаэростате, эксикаторе) такими веществами, как пирогаллол или гидросульфит натрия
- •3) Биологические методы основаны на совместном выращивании анаэробов со строгими аэробами (метод Фортнера)
- •Комбинированные методы основаны на сочетании физических, химических и биологических методов создания анаэробиоза
Питательные среды (состав некоторых питательных сред)
Кровяной агар. Используют для выявления экзотоксина – гемолизина у бактерий. К расплавленному и охлажденному до 45°С МПА (2% агара) стерильно добавляют 5-10% дефибринированной стерильно взятой крови лошади, кролика или барана.
Щелочная пептонная вода. Используют для культивирования холерных вибрионов. Основной раствор пептона: пептона - 100 г, хлорида натрия -50 г, нитрата калия - 1 г, карбоната натрия - 25 г, воды дистиллированной - 1 л; рН 9,0. Стерилизуют при 120°С 20 мин. Для получения пептонной воды основной раствор разводят водой в 10 раз, доводят рН до 8,8 -8,9, стерилизуют.
Мясопептонный агар (МПА). Применяют для выращивания большинства бактерий. К готовому МПБ добавляют 2% агар и оставляют для набухания 30 мин. Кипятят до полного растворения агара. Стерилизуют 30 мин при 120°С.
Желточно - солевой агар (ЖСА). Среда позволяет дифференцировать стафилококки, продуцирующие лецитиназу, от стафилококков, не выделяющих данный фермент, по образованию зон помутнения с перламутровым оттенком вокруг колоний. Среда содержит повышенные концентрации хлорида натрия (8-10%), которые не препятствуют размножению стафилококков, что обеспечивает элективность среды. Готовят среду из питательного солевого агара. В расплавленный и остуженный до 45 0С агар добавляется куриный желток.
Среда 199. Используют для выращивания культур клеток. Синтетическая среда, содержащая аминокислоты, витамины, глюкозу, минеральные соли. Среду используют с добавлением 5-10% коровьей или лошадиной сыворотки.
Дифференциально-диагностические среды.
1. Пс для культивирования и изучения биохимических свойств.
1.1. Среды Эндо, Левина, Плоскирева. Используют как дифференциально-диагностические элективные среды для культивирования бактерий кишечной группы (содержит лактозу). Микроорганизмы, ферментирующие находящийся в этих средах молочный сахар (лактозу) образуют окрашенные колонии - лактозоположительные (колонии красного цвета с металлическим блеском или без блеска). Колонии микробов, не ферментирующие лактозу, бесцветные - лактозонегативные – нежно-розовые, прозрачные, пропускающие свет.
К 100 мл МПА (рН 7,6) при температуре 70°С стерильно добавляют 5 мл 20% раствора лактозы и смесь 0,5 мл насыщенного раствора основного фуксина с 1,25 мл свежеприготовленного раствора сульфата натрия.
1.2.Среды с крахмалом определяют микроорганизмы, образующие амилазу. Об этом узнают, прибавив к культуре несколько капель раствора Люголя, - цвет среды не изменяется. Нерасщепленный крахмал дает с этим раствором синее окрашивание.
1.3.Молоко. При росте микроорганизмов, сбраживающих лактозу, свертывается.
2. Коммерческие наборы – для изучения биохимических свойств (определение набора ферментов микроорганизмов для их идентификации).
2.1. Микротесты - системы (МТС). Они представляют собой полистироловые пластины с лунками, в которых содержатся стерильные дифференциально-диагностические среды.
2.2.Системы индикаторные бумажные (СИБ) - дифференциально-диагностические среды на фильтровальной бумаге.
Для культивирования и дифференциации анаэробных микроорганизмов: среда Вильсон-Блера. Готовят из мясо-пептонного агара, к которому добавляют глюкозу, Na2S03, хлорид железо FeCl2. На этой среде возбудитель газовой гангрены образует почернение и разрыв агара. Рост происходит в глубине агара. При этом осуществляется восстановление Na2S03 в Na2S (сульфит натрия), который соединяясь с хлоридом железа, образует сульфат железа черного цвета. Разрыв питательной среды связан с газообразованием.