Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Методичка биохимия 2012.docx
Скачиваний:
13
Добавлен:
01.04.2025
Размер:
1.7 Mб
Скачать

14.1 Качественная реакция на витамин в2

Испытуемый материал: рибофлавин (в таблетках).

Реактивы: концентрированная соляная кислота; цинк металлический, гранулированный; дистиллированная вода.

Проведение анализа

Одну десятую часть таблетки растворяют в 0,5 см3 дистиллированной воды, наблюдают окрашивание и флюоресценцию раствора. В раствор добавляют десять капель концентрированной соляной кислоты и небольшой кусочек металлического цинка. Жидкость постепенно окрашивается в розовый цвет, а затем обесцвечивается. Реакция обусловлена восстановлением рибофлавина выделяющимся водородом сначала в рибофлавин красного цвета, а затем в бесцветный лейкофлавин. При взбалтывании обесцвеченного раствора лейкосоединение вновь окисляется кислородом воздуха в рибофлавин.

14.2 Качественные реакции на витамин а

Испытуемый материал: 0,05% раствор витамина А в хлороформе или рыбий жир.

Реактивы: уксусная кислота ледяная; сульфат железа (II); серная кислота концентрированная.

Проведение анализа

Реакция с сульфатом железа (II)

К 1–2 каплям рыбьего жира или 0,05% раствора витамина А в хлороформе добавляют 5-10 капель ледяной уксусной кислоты, насыщенной сульфатом железа (II) и 1–2 капли концентрированной серной кислоты. Появляется голубое окрашивание, постепенно переходящее в розово-красное. Каротины дают при этой реакции зеленоватое окрашивание.

Реакция с серной кислотой (реакция Друммонда). Одну каплю рыбьего жира растворяют в 4–5 каплях хлороформа и прибавляют одну каплю концентрированной серной кислоты. Появляется голубое окрашивание, переходящее в буро-красное.

В основе реакции лежит способность серной кислоты отнимать от витамина А воду с образованием цветных продуктов реакции.

14.3 Качественные реакции на витамин д

Испытуемый материал: рыбий жир.

Реактивы: анилин, раствор брома в хлороформе (1:60); соляная кислота концентрированная.

Проведение анализа

Реакция с анилином. В сухую пробирку наливают 1 см 3 рыбьего жира и 1 см 3 смеси анилина с концентрированной соляной кислотой (15:1), перемешивают, осторожно нагревают при постоянном помешивании до кипения и кипятят полминуты. При наличии витамина Д желтая эмульсия становится сначала зеленой, а затем – красной. Через 1 – 2 мин эмульсия делится на два слоя, причем нижний слой имеет интенсивную красную краску.

Бромхлороформная проба. В сухую пробирку наливают 1 см3 рыбьего жира и 1 см3 раствора брома в хлороформе (1:60). В присутствии витамина Д возникает зеленовато-голубое окрашивание.

14.4 Качественные реакции на витамин е

Испытуемый материал: α-токоферол концентрацией 0,1% в 96% этиловом спирте.

Реактивы: концентрированная азотная кислота, хлорид железа.

Проведение анализа

Реакция с концентрированной азотной кислотой. В сухую пробирку берут 4-5 капель 0,1% спиртового раствора α-токоферола, прибавляют 10 капель концентрированной азотной кислоты и встряхивают пробирку. Образуется эмульсия, которая постепенно расслаивается и верхний маслянистый слой приобретает красную окраску. Окрашивание обусловлено окислением α-токоферола до α-токоферилхинона, окрашенного в красный или желтовато-красный цвет.

Реакция с хлоридом железа. В сухую пробирку берут 4-5 капель 0,1 спиртового раствора α-токоферола, добавляют 0,5 см 3 хлорида железа и тщательно перемешивают содержимое пробирки. Раствор окрашивается в красный цвет в результате окисления α-токоферола в α-токоферилхинон.