Спектрофотометрические методы

Спектрофотометрические методы определения общего белка сыворотки крови основаны на измерении светопоглощения в ультрафиолетовой области.

Растворы белка обладают поглощением при 270–290 и 200–225 нм. Поглощение при 270–290 нм определяется присутствием в молекуле белка ароматических аминокислот — тирозина, триптофана и фенилаланина. Поглощение при 200–225 нм практически в 20 раз выше, чем при 280 нм, и обусловлено главным образом пептидными связями.

Точность и специфичность методов определения белка, основанных на поглощении при 270 –290 нм, невелика, поскольку содержание тирозина и триптофана может колебаться в различных белках сыворотки крови. Кроме того, присутствие в сыворотке свободных аминокислот — тирозина и триптофана, мочевой кислоты и билирубина, поглощающих при 280 нм, вносит определенную погрешность. В связи с этим данный метод не используют для прямого определения содержания общего белка в сыворотке.

Напротив, поглощение в ультрафиолетовой области — 200 – 225 нм обусловлено в основном пептидными связями, в связи с чем величина поглощения различных белков сыворотки различается незначительно. В этом спектральном диапазоне закон Бера соблюдается при концентрации белка в сыворотке до 120 г/л.

Определение общего белка сыворотки крови с помощью прямой фотометрии при 210 нм обеспечивает получение результатов, сравнимых с биуретовым методом и методом Кьельдаля. В то же время данный метод практически не применяется из-за необходимости использования кювет, не поглощающих при 210 нм, и монохроматора, что удорожает метод.

Рефрактометрические методы

Рефрактометрические методы определения общего белка сыворотки основаны на способности растворов белка к преломлению светового потока. При температуре 17,5 °С показатель преломления воды равен 1,3332, при той же температуре показатель преломления сыворотки колеблется в пределах 1,3480–1,3505. В связи с тем, что концентрация электролитов и небелковых органических соединений, влияющих на ее преломляющую способность, невелика и достаточно постоянна в сыворотке здорового человека, величина показателя преломления сыворотки крови зависит в первую очередь от содержания в ней белков. Калибровку прибора проводят сывороткой с известной концентрацией белка. Простота делает рефрактометрию удобным методом для определения содержания общего белка в сыворотке крови, хотя при ряде заболеваний, в частности, при сахарном диабете, хронической почечной недостаточности его использование может приводить к существенной ошибке.

Колориметрические (фотометрические) методы

Колориметрические методы определения общего белка основаны на цветных реакциях белков с хромоген-образующими реактивами или на неспецифическом связывании красителя.

Среди колориметрических методов определения концентрации общего белка сыворотки наиболее распространенным считается биуретовый метод, основанный на так называемой «цветной биуретовой реакции», в ходе которой белки реагируют в щелочной среде с сульфатом меди с образованием соединений, окрашенных в фиолетовый цвет, интенсивность окраски зависит от концентрации общего белка в сыворотке. Биуретовый метод определения общего белка в сыворотке крови был утвержден в качестве унифицированного в 1972 г.

Колориметрические методы определения общего белка сыворотки крови достаточно просты и относительно дешевы. К недостатку метода относится интерферирующее действие некоторых веществ (в том числе лекарств).

Другие методы определения общего белка сыворотки крови

Флюориметрические и другие современные методы определения общего белка (например, поляриграфический микрометод или атомно-абсорбционный анализ) обладают высокой чувствительностью и специфичностью, однако необходимость ввода специальной аппаратуры, а иногда и специальной квалификации аналитика наряду с достаточно высокой стоимостью определения делает этот метод достоянием научно-исследовательских учреждений и значительно ограничивает его использование в клинической лаборатории.

Мочевина в крови. Клинико-диагностическое значение определения мочевины в крови

Мочевина является главным конечным продуктом обмена аминокислот. Синтезируется мочевина из аммиака, который постоянно образуется в организме при окислительном и неокислительном дезаминировании аминокислот, при гидролизе амидов глутаминовой и аспарагиновой кислот, а также при распаде пуриновых и пиримидиновых нуклеотидов. Часть аммиака образуется в кишечнике в результате действия бактерий на пищевые белки (гниение белков в кишечнике) и поступает в кровь воротной вены. Аммиак - токсичное соединение. Даже небольшое повышение его концентрации оказывает неблагоприятное действие на организм, и прежде всего - на центральную нервную систему. Несмотря на то, что аммиак постоянно продуцируется в тканях, он содержится в периферической крови лишь в следовых количествах, так как быстро удаляется из кровеносной системы печенью, где входит в состав глутамата, глутамина и мочевины. Биосинтез мочевины является основным механизмом обезвреживания аммиака в организме.

Определение концентрации мочевины в моче проводится значительно реже, чем определение уровня мочевины в крови и используется обычно при при обнаружении повышенного уровня мочевины в крови и решении вопроса о состоянии выделительной функции почек. При этом определяют суточную экскрецию мочевины с мочой. Повышенное содержание мочевины крови при снижении суточной экскреции с мочой чаще свидетельствует о нарушении азотовыделительной функции почек. Однако не стоит забывать, что повышение уровня мочевины в крови с одновременным снижением ее экскреции встречается и при экстраренально возникающей функциональной почечной недостаточности, развивающейся при уменьшении почечного кровотока, что наблюдается при возникновении гиповолемии или в условиях застоя при сердечной недостаточности. Напротив, одновременное увеличение уровня мочевины в крови и экскреции ее с мочой свидетельствует о том, что азотовыделительная функция почек не нарушена, одновременное повышение содержания мочевины в крови и моче связано с избыточным образованием мочевины в организме и носит транзиторный характер. На уровень мочевины в моче, также как и в крови, могут влиять не только патологические, но и физиологические факторы (характер питания, физическая нагрузка и т. д.), а также прием лекарственных препаратов.

Нормальные значения уровня мочевины в моче

Экскреция мочевины с мочой (при диете со средним содержанием белка) в норме составляет у взрослых 333,0 — 587,7 ммоль/сут (20 — 35 г/сут). У детей суточная экскреция мочевины с мочой ниже и увеличивается с возрастом: 1-я нед — 2,5 — 3,3 ммоль/сут, 1 мес — 10,0 — 17,0 ммоль/сут, 6 - 12 мес — 33 — 67 ммоль/сут, 1 — 2 года — 67 — 133 ммоль/сут, 4 — 8 лет — 133 — 200 ммоль/сут, 8 — 15 лет — 200 — 300 ммоль/сут.

Повышение уровня мочевины в моче

Увеличение экскреции мочевины с мочой наблюдается при:

• злокачественной анемии (вследствие отрицательного азотистого баланса);

• лихорадке;

• после приема некоторых лекарственных препаратов (салицилатов, хинина, передозировке тироксина и др.);

• гиперпротеиновой диете;

• гиперфункции щитовидной железы;

• введении в организм 11-оксикортикостероидов;

• в послеоперационном состоянии.

Снижение уровня мочевины в моче

Уменьшение экскреции мочевины с мочой наблюдается:

• у здоровых растущих детей;

• во время беременности;

• при диете с низким содержанием белка и высоким содержанием углеводов;

• при приеме СТГ, тестостерона, инсулина, анаболических гормонов (положительный азотистый баланс);

• в период выздоровления;

• при заболеваниях почек и почечной недостаточности любого происхождения;

• при паренхиматозной желтухе, острой дистрофии печени, прогрессирующем циррозе печени (вследствие нарушения образования мочевины);

• при врожденной недостаточности или отсутствии ферментов, участвующих в синтезе мочевины;

• при токсемии.

Мочевая кислота - показатель суточной экскреции из организма мочевой кислоты, характеризую­щий метаболизм пуринов.

Мочевая кислота, выводимая с мочой, отражает поступление пуринов с пищей и распад эндогенных пуриновых нуклеотидов. Около 70% общего количества мочевой кислоты выводится с мочой. Клиренс мочевой кислоты составляет около 10% профильтрованного количества. Почечная экскреция мочевой кислоты является производной профильтрованного количества, которое полностью реабсорбируется в проксимальном канальце, а также секреции и реабсорбции в дистальном канальце.

Определение мочевой кислоты в моче необходимо проводить совместно с ее определением в крови. Это позволяет во многих случаях установить патологический механизм, лежащий в основе подагры у больного (избыточная продукция мочевой кислоты в организме или нарушение ее выведения). При нарушении выведения высокий уровень мочевой кислоты в крови не сопровождается увеличением концентрации мочевой кислоты в моче.

Определение механизма развития подагры помогает клиницисту и в выборе схемы лечения больного.

Содержание мочевой кислоты в моче тесно связано с диетой (пурины содержатся в большом количестве в мясе), функционированием почек, интенсивностью синтеза и рас­пада нуклеиновых кислот, текущим воздействием лекарственных препаратов и так да­лее. Увеличение выведения мочевой кислоты наблюдается при гиперурикемии - повы­шении ее содержания в крови выше 0,42 ммоль/л у мужчин и выше 0,36 ммоль/л у жен­щин. Оценку экскреции мочевой кислоты с мочой применяют для выбора соответствующего лечения бессимптомного повышения уровня мочевой кислоты в крови. Уровень экскреции моче­вой кислоты с мочой менее 3,5 ммоль/сутки (менее 600 мг/сутки) при гиперурикемии го­ворит о целесообразности применения препаратов, усиливающих ее выведение.

Показания к назначению анализа:

1. Диагностика нарушений пуринового обмена (подагра).

2. Диагностика эндокринных заболеваний.

3. Болезни крови.

4. Интоксика­ция свинцом.

5. Подозрение на дефицит в пище фолиевой кислоты.

Метод определения: энзиматический (уриказный).

Единицы измерения в лаборатории ЕВРОЛАБ: ммоль/сут.

Альтернативные единицы: мг/сутки

Коэффициенты пересчета: мг/сут х 0,059 ==> ммоль/сут.

Референсные значения при обычной диете:

Возраст	Мочевая кислота, ммоль/сут
< 1 года	0,35 - 2,0
1 - 4 года	0,5 - 2,5
4 года - 8 лет	0,6 - 3,0
8-14 лет	1,2-6,0
> 14 лет	1,48-4,43

Повышение значений:

1. Лейкемия.

2. Подагра.

3. Синдром Леша - Нигана.

4. Болезнь Вильсона - Коновалова.

5. Цистиноз,

6. Вирусный гепатит.

7. Истинная олицитемия.

8. Серповидноклеточная анемия.

9. Крупозная пневмония.

10. Эпилепсия.

Снижение значений:

1. Ксантинурия.

2. Дефицит фолиевой кислоты.

3. Свинцовая интоксикация.

4. Нарастающая атрофия мышц.

5. Прием таких лекарственных препа­ратов, как йодид калия, хинин, атропин

В нормальной моче индикан содержится в незначительном количестве, которое не обнаруживается обычными качественными пробами. Индиканурия встречается при интенсивном гниении белковых веществ в кишечнике (колит, непроходимость кишечника, рак, абсцесс кишечника, перитонит, запоры и пр.), а также при усиленном распаде белков в организме (опухоль, эмпиема, абсцессы и др.). Принцип методов определения индикана — превращение индикана в индоксил минеральной кислотой и последующее окисление индоксила (хлорным железом или марганцовокислым калием) в индиго синее или красное. Проба Яффе

Аланинаминотрансфераза АЛТ (АлАТ) присутствует в очень больших количествах в пе­чени и почках, в меньших — в скелетных мышцах и сердце. Аспартатаминотрансфераза (ACT) (АсАТ) распределена во всех тканях тела. Наибольшая актив­ность имеется в печени, сердце, скелетных мышцах и эритро­цитах.