Приготувати з вакцини бцж фіксований препарат та пофарбувати його за методом Ціля-Нільсена.
Фарбування кислотостійких бактерій
На відміну від інших бактерій мікобактерії здатні утримувати барвники навіть після обробки кислотами. Тому вони і називаються кислотостійкими. При прогріванні мазків з мікобактеріями над полум’ям підвищується проникність клітинної стінки для барвників (метод Ціля-Нільсена).
Процедура фарбування кислотостійких бактерій
На
фіксований препарат накладають смужку
фільтрувального паперу розміром трохи
менше предметного скла, але так, щоб
вона закривала мазок повністю (див.
мал.). Фільтрувальний папір використовують
для того, щоб фарба не розливалася по
склу. Одночасно за рахунок використання
фільтрувального паперу запобігається
можливе осадження кристалів фарби на
мазок.Н
Рис. 3 Фарбування за Цілем-Нільсеном (підготовчий етап).
аливають на папір розчин карболового фуксину (препарат повинен бути гарно змочений) і нагрівають препарат над полум'ям пальника до появи легкої хмаринки пари, не допускаючи закипання фарби і підсихання паперу. Об'єм фарбувального розчину має бути достатнім
для того, щоб його повторно не наносити
на вже розігрітий мазок. У випадку висихання мазка і повторного нанесення барвника нагрівайте мазок до появи пари повторно.
Мазок залишають на 5 хвилин з барвником, щоб він проник в клітинну стінку мікобактерій і зафарбував її.
Пінцетом обережно знімають фільтрувальний папір і обережно(!) змивають залишки фарби слабким струменем води.
Після цього мазок знебарвлюють 25% розчином сірчаної кислоти чи 3% соляно-кислим спиртом, домагаючись візуального ефекту повного знебварвлення. Тривалість процедури знебварвлення - 3 хвилини.
Мазок промивають проточною водою.
Мазок
дофарбовують 0,3% розчином метиленового
синього впродовж 60 секунд.Мазок промивають проточною водою.
Мазок висушують при кімнатній температурі у вертикальному положенні.
Рис.
4 Фарбування за Цілем-Нільсеном (фарбування
метиленовим синім). .
-
Назва препарату
Рисунок
Характеристика морфологічних та тинкторіальних властивостей
Мікроскопічне дослідження демонстраційних мікропрепаратів.
-
M. tuberculosis у харкотинні хворого, фарбування за методом Ціля-Нільсена
M. leprae у матеріалі від хворого, фарбування за методом Ціля-Нільсена
Чиста культура M.avium, фарбування за методом Грама
Рисунок
Тинкторіальні та морфологічні властивості