Вивчити та врахувати рра з сироватками крові від хворого н., яка була поставлена для діагностики кашлюка.
Принцип. Розгорнута РА для серодіагностики ставиться із сироваткою хворого, яку розводять фізрозчином від 1:50 - 1:100 до 1:800 або 1: 1600. Оскільки в нижчих титрах сироватки можуть знаходитися нормальні аглютиніни, наявні у здорових людей або хворих з іншим діагнозом (діагностичний титр). Як антиген у цій реакції використовують діагностикуми - свідомо відомі суспензії, як правило, убитих бактерій, з якими безпечно працювати.
Реакцію проводять так. У аглютинаційні пробірки заздалегідь розливають по 1 мл ізотонічного розчину натрію хлориду. У першу з них доливають 1 мл сироватки, розводять 1:100, і, змішавши її, 1 мл переносять у другу, з другої - в третю і так далі. У отримані двократні розведення сироваток (від 1:100 до 1:1600 і більше) вносять по 1-2 краплі суспензії бактерій, що містить 3 млрд мікробних тіл в 1 мл. Пробірки струшують і поміщають у термостат при 37°С на 2 години, потім добу витримують при кімнатній температурі.
Облік реакції розгорнутої аглютинації роблять, оцінюючи послідовно кожну пробірку, починаючи з контрольних, при обережному струшуванні. У контрольних пробірках аглютинації не повинно бути. Інтенсивність реакції аглютинації відмічають такими знаками: ++++ - повна аглютинація (пластівці аглютинату в абсолютній прозорій рідині); +++ - неповна аглютинація (пластівці в слабко опалесціювальній рідині); ++ - часткова аглютинація (пластівці чітко помітні, рідина злегка каламутна); + - слабка, сумнівна аглютинація - рідина дуже каламутна, пластівці в ній погано помітні; - - відсутність аглютинації (рідина рівномірно каламутна).
Титром сироватки вважають останнє її розведення, в якому інтенсивність аглютинації оцінюється не менше ніж двщма плюсами (++).
Компоненти |
Номер пробірки |
||||||
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
||
0.9 % розчин NaCl, мл |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
1.0 |
|
Розведення сироватки |
1:40 |
1:80 |
1:160 |
1:320 |
1:640 |
- |
|
Діагностикум, мл |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
|
Інкубація при 37°C 1 годину, потім при кімнатній температурі 18 годин |
|||||||
Обрахування результатів |
1-ша сироватка |
|
|
|
|
|
|
Рисунок |
|
|
|
|
|
|
|
2-га сироватка |
|
|
|
|
|
|
|
Рисунок |
|
|
|
|
|
|
|
Висновок (з поясненнями): _________________________________________________________________