Способи проведення тшх

Підготовка проби є дуже відповідальною операцією в ТШХ.Розмивання в ТШХ в першу чергу пов'язано з якістю нанесення стартовою зони зразка.

Вибір розчинника і способи нанесення проби

До розчинника, з якого пробу наносять на шар сорбенту, висувають такі вимоги: повна розчинність в ньому всіх компонентів проби; відносна летючість (для швидкого видалення з пластини перед початком поділу); низьке значення R f (При використанні полярних розчинників, в яких R f поділюваних речовин близько до 1, проби хроматографують безпосередньо при нанесенні, що спотворює форму стартового плями і може впливати на R f, особливо при ТШХ в менш полярних елюента); хороша змочуваність шару (важливо для ОФТСХ).

Стартова зона повинна бути по можливості мінімальною, особливо для ВЕТСХ.Занадто висока концентрація речовини в стартовому плямі може уповільнити розчинення проби при елюювання.

Для нанесення проб використовують скляні платино-іридієві капіляри, мікропіпетки, шприци, а також спеціальні дозуючі пристрої, наприклад, платино-іридієві капіляри з максимальним об'ємом дозування 22 нл на 1 м довжини.При відборі однієї і тієї ж проби капіляром відтворюваність введення проби становить ± 0,7% від її обсягу.

При нанесенні в'язких проб можна нагрівати пластини або підсушувати їх феном для безперервного випаровування розчинника.Використання двофазних пластин з предадсорбціонним шаром знімає багато проблем.На кордоні двох сорбентів зона стискається у вигляді вузької смуги незалежно від якості нанесення стартового плями (рис. 2).

Рис.2.ТШХ суміші барвників на двофазних пластинах з предадсорбціонним шаром.

Рис.3.Послідовність операцій при нанесенні зразка контактним способом

Пробу можна сконцентрувати в вузьку стартову зону при зануренні пластини в розчинник, для якого значення R f всіх компонентів близькі до 1, і пропусканням його трохи вище зони нанесення проби, після чого елюювання припиняють, а пластину швидко висушують.Подібну операцію повторюють кілька разів.Для в'язких і розбавлених проб ефективний спосіб контактного нанесення.На рис.3 показана послідовність операцій нанесення проби за цим методом:

а) над отвором в металевій пластині поміщають змочену перфторкосіном етиленпропіленовий плівку, яка не змочується ніякими розчинниками;

б) за допомогою вакуумування плівка щільно притискається до пластини і злегка втягується в отвір, утворюючи поглиблення;

в) у поглиблення вносять пробу, яка залишається там у вигляді кулястої краплі, так як не змочує плівку;

г) розчинник випаровують, підсушуючи зверху феном, поки кулька не зменшиться до потрібного розміру;

д) пластину поміщають шаром вниз на плівку над пробою і, замінюючи вакуум легким тиском, переносять на неї пробу.

Цей метод дозволяє нанести на пластину одночасно декілька зразків без їх попереднього розчинення і концентрувати розбавлені проби.

Істотним є сталість відстані лінії нанесення проб від нижнього краю пластини і лінії занурення пластини в елюент.

Способи проведення ТШХ

Лінійна, круг і антікруговая ТШХ.У колоночной рідинної хроматографії можливе тільки лінійне рух елюента.У ТШХ завдяки відкритому шару сорбенту можна здійснити три типи елюювання: лінійне, круговий та антікруговое (рис. 4).Крім того, в ТШХ можна реалізувати додатково різні методики, що дозволяють значно збільшувати пікову ємність.

Найбільш широко використовують лінійний розвиток хроматограм.Проби наносять на стартову лінію паралельно одній із сторін пластини.Пластину поміщають вертикально в хромато-графічну камеру, на дно якої налитий елюент, і проводять висхідну ТШХ.У лінійному ТШХ зі збільшенням R f, речовини розмивання збільшується.Лінійне розвиток хроматограм можна здійснити і при горизонтальному положенні пластини

Рис.4.Типи елюювання в ТШХ: а - лінійне; б - лінійне (горизонтальне); в - круговий; г - антікруговое з подачею на неї елюента з однієї або з обох сторін.

Для висхідній лінійної ТСХ в якості хроматографічної камери можна використовувати будь-яку посудину прямокутної або циліндричної форми.Однак у таких камерах важко отримати відтворювані результати, оскільки у міру підняття елюента по пластині відбуваються фронтальне поділ елюента в шарі сорбенту (ТШХ полізональная), адсорбція і капілярна конденсація компонентів елюента з парової фази на суху частину пластини та інші процеси.У подібних камерах, можна проводити ТСХ з насиченням (стінки камери покривають фільтрувальним папером, змоченою елюентом) або без насичення.

Для зменшення впливу парової фази в лінійній ТШХ використовують «сендвіч»-пластини.З трьох сторін двох пластин знімають вузький шар сорбенту і, проклавши між ними прокладку (товщина 0,5-2 мм), щільно скріплюють такий «сендвіч»-затиском і опускають в камеру з елюентом.ТШХ проводять, таким чином, одночасно на двох пластинах, розташованих шаром один до одного.В якості другої пластини можна використовувати, скляну підкладку без шару адсорбенту.

У кругової ТШХ проби наносять на деякій відстані від центру пластини по колу, а елюент подають до центру (рис. 4, б).Оптимальний дозвіл досягається кругової хроматографією при К '= 100 (R f = 0,009), тобто добре розділяються речовини з низькими значеннями R f.

У антікруговой ТШХ проби наносять по колу по периферії пластини і елюент подають в напрямку до центру пластини (рис. 4, г).При цьому хроматографічні зони стискаються у міру руху по пластині.У антікруговой ТШХ одночасно можна аналізувати найбільшу кількість проб.Це найбільш швидкий метод ТШХ.Антікруговая ТШХ дає гарні результати при поділі речовин з високими значеннями R f.Для реалізації кругової і антікруговой ТШХ фірма «Камаг» випускає спеціальні так звані U-камери.Застосування U-камер дозволяє підвищити відтворюваність результатів ТШХ за рахунок елімінування впливу парової фази і можливості проведення ТСХ в атмосфері інертного газу.Крім того, є можливість наносити пробу в потік елюента.Кругову і антікруговую ТШХ можна реалізувати і простішим способом при використанні, наприклад, чашки Петрі для кругової ТШХ і 2 чашок Петрі, вставлених одна в іншу для антікруговой ТШХ.Для збільшення пікової ємності в ТШХ використовують методи проточною, багаторазовою, градієнтної і двовимірної ТШХ.[1]