Кольорові реакції

Кольорові реакції в тонкошарової хроматографії використовуються надзвичайно широко.Вони служать не тільки для визначення місця розташування розділених компонентів (обробка сірчаною кислотою, парами йоду), а й визначення як класу речовин, так і ідентифікації (за наявності індивідуальних реакцій).При збігу всіх якісних реакцій і збігу отриманих значень Rf речовини в трьох різних системах з літературними даними, речовина ідентифіковано.[3]

1.4.14 Порівняння зі свідком

При проведенні досліджень речовин з передбачуваним складом, застосовують метод хроматографирования зі свідком - відомим речовиною.Цей метод використовується коду важко витримати умови хроматографування, немає літературних даних Rf для даної системи або адсорбенту, використання градієнтного методу і т.д.Та й при проведенні кольорових реакцій можна порівняти не тільки кольору, а й відтінки досліджуваних речовин і свідків, що також важливо.[3]

З іншого боку цей метод потребує додаткових витрат на свідки.

Фізико-хімічні методи ідентифікації

Принадність тонкошарової хроматографії полягає в тому, що після хроматографування кожне розділене речовину можна надалі досліджувати іншими методами набагато простіше.І справа тут не в тому, що інші методи хроматографирования не можуть цього.Справа тут в складності виділення і матеріальних витратах на спеціальні пристосування, у яких тільки одна задача - виділити речовину.

У тонкошарової хроматографії є тільки одна складність - зняти шар сорбенту і вимити з нього речовину.Надалі можна його досліджувати з використанням ІК і УФ-спектрометрії, рентгено-структурними методами, ЯМР і т.д.

Тому, використовуючи тонкошарову хроматографію для розділення сумішей, можна не тільки досліджувати кожен компонент різними методами, але і напрацювати невелика кількість, в тому числі і для свідків.[4]

Методи кількісного аналізу

Кількісний аналіз у тонкошарової хроматографії має декілька видів, що характеризує кожний етап розвитку методу.І хоча деякі методи можна застосовувати тільки як напівкількісний, вони до цих пір застосовуються на практиці.

Метод візуального порівняння.Як говорилося вище, інтенсивність забарвлення плями і його розмір від кількості хроматографіруемого речовини.Тому візуальне кількісне визначення побудовано на кількох прийомах.

Метод розведення.Цей метод полягає в тому, що для кожної речовини визначають граничну концентрацію, при якій речовина не може бути визначено хроматографічним методом.При хроматографирования досліджуваної речовини поводять розбавлення до тих пір, поки воно перестає проявлятися на платівці.Зміст речовини С, певне таким методом знаходять за формулою:

C = an

де n - розведення, а - концентрація речовини, при якому воно не виявляється при хроматографирования.

Метод визначення площі плями.Якщо наносити однакові обсяги досліджуваних речовин і свідків, то утворені після хроматографування площі плям пропорційна логарифму концентрації речовини.

S = alnc + b

де а і b - емпіричні коефіцієнти, які визначаються експериментальним шляхом.

Якщо пляма розділеного речовини має різкі границі, то площа плями можна визначити ваговим методом (вирізати пляму і зважити), заміряється планіметрії.Цей метод дає помилку до 10-15%.

Однак він має ряд істотних недоліків.Перший і найсуттєвіший в тому, що таким чином можна визначати концентрацію пофарбованих речовин або мають флуоресценцію в УФ області (254, 366 нм).Цей недолік можна усунути додаванням в сорбент різних люмінофорів, то при цьому збільшується похибка визначення.Обробка пластин проявляють речовинами (реактивами) також може бути використана (наприклад використання фільтрувального паперу просоченої виявляють реагентом з наступним контактом з хроматографічної платівкою і подальшим визначенням на ній площі проявленого речовини), але похибка визначення також висока.

Необхідність більш достовірного результату кількісного визначення призвела до використання інструментальних методів.

Метод елюювання.Цей метод полягає в тому, що розділене речовина змивають з сорбенту розчинником і визначають його концентрацію вже іншими методами - фотометричними, полярографічним і т.д.Це досить точний метод, але тільки за умови кількісного виділення розділеного речовини.Через високу трудомісткості метод використовується досить рідко і неприйнятний при великій кількості досліджуваних зразків.

Фотографічний метод визначення полягає у фотографуванні пластинок з розділеним речовиною і подальшим визначенням ступеня почорніння, з використанням десінтометров.

Радіографічний метод аналогічний фотометричним, тільки з тією різницею, що визначається почорніння пластинки, викликане випромінюванням розділеного речовини.Цей метод використовується тільки при визначенні речовин з міченими атомами.

Фотодесінтометріческій метод може бути використаний без виділення речовини з платівки і заснований на визначенні не тільки площі плями, але і його інтенсивності.

Це найбільш точний метод визначення концентрації речовин, тому що дозволяє при використанні калібрувальних графіків, проводити досить точні кількісні визначення всіх розділених речовин (до 2-10%) безпосередньо на платівці за короткий проміжок часу.

Не дивно, що при розвитку тонкошарової хроматографії, застосування десінтометров збільшується, чутливість і, отже, точність визначення концентрації розділених речовин підвищується і наближається до точності високоефективної рідинної хроматографії.[Алесковскій В.Б., Бардін В.В., Булатов М.І.Фізико-хімічні методи аналізу.Практичне керівництво .- Л.: Хімія, 1988.- 376с.]