Якісна реакція 4. Реакція Адамкевіча.

Амінокислота триптофан в кислому середовищі взаємодіє з альдегідами кислот і утворює продукти конденсації червоно-фіолетового кольору.

В пробірку вносять 1 краплю нерозведеного білка і додають 10 крапель концентрованої оцтової кислоти. Потім нахиливши пробірку, обережно по стінці додають краплями приблизно 0,5 мл концентрованої Н₂SО₄ так, щоб рідини не змішувались. Через деякий час на межі рідин з’являється червоно-фіолетове кільце.

Частина 2. Реакції осадження ( денатурації ) білків

Матеріали та обладнання: нерозведений та 1% р-н яєчного білку; насичений розчин сульфату амонію, 10% р-н NаОН, 1% та 10% р-ни СuSО₄, 1% та 10% розчини оцтової кислоти; концентровані кислоти : НNО₃ ,НСl , Н₂SО₄ , 10% р-н трихлороцтової кислоти; 10% р-н сульфосаліцилової кислоти; 5% р-н ацетату свинцю, 5% р-н нітрату срібла .

Хід роботи.

Дослід 1. Зворотне осадження білків. Висолювання.

1. В пробірку налити 30 крапель нерозведеного яєчного білка і додати рівну кількість насиченого розчину сульфату амонію. Вміст пробірки перемішати. Отримують напівнасичений р-н сульфату амонію, при цьому глобулінова фракція білка осаджується, а альбумінова - залишається в розчині.

2. Через 5 хвилин осад відфільтрувати. На фільтрі залишається глобулінова фракція, а в фільтраті – альбумінова. Осад з фільтру зняти скляною паличкою і перенести в пробірку. Додати 5 крапель Н₂0. Осад розчиняється. Наявність в розчині білку можна довести за допомогою біуретової реакції.

3. В пробірку з фільтратом додати порошок сульфату амонію до повного насичення розчину. При цьому випадає осад – альбумін. Осад відфільтрувати, розчинити і провести біуретову реакцію.

Дослід 2. Незворотнє осадження білків.

А) Осадження при кип’ятінні.

Нерозведений білок налити у пробірку і нагріти на спиртівці. Відмітити денатурацію білка.

Б) Осадження під дією концентрованих розчинів мінеральних кислот.

Концентровані кислоти призводять до денатурації білка за рахунок видалення факторів стійкості білка у розчину. При надлишку соляної та сірчаної кислот осад денатурованого білка знову розчиняється. Це відбувається в результаті перезарядки молекул білка і часткового його гідролізу. При додаванні надлишку азотної кислоти розчинення осад не відбувається. В зв’язку з цим для визначення малої кількості білка в сечі у клінічних лабораторіях використовують азотну кислоту.

1.В три пробірки налити по 5 крапель концентрованих НNО₃, НСl, Н₂SО₄ .

2. Нахиливши по черзі кожну з пробірок під кутом 45^о , обережно по стінці пробірки (так, щоб рідини не змішувались) додати такий же об’єм розчину яєчного білку. На межі двох рідин з’являється осад білка у вигляді білого кільця.

3. Обережно струсити пробірки, прослідкувати за розчиненням білка в пробірках з НСl та Н₂SО₄. В пробірці з НNО₃ білок залишається в осаді.

В) Осадження органічними кислотами.

Трихлороцтова кислота осаджує тільки білки, а сульфасаліцилова ще й високомолекулярні пептиди. Як більш чутлива сульфосаліцилова кислота використовується в клінічних аналізах для визначення білка в сечі.

1. В дві пробірки додати по 5 крапель розчину білка.

2. В одну з цих пробірок додати 2 краплі сульфосаліцилової кислоти, а в другу 5 крапель трихлороцтової кислоти.

3. Відмітити випадання осаду білка.

Г) Осадження важкими металами.

Білки при взаємодії з солями важких металів денатуруються і випадають в осад. При надлишку деяких солей спостерігається розчинення утвореного осаду. Це пов’язано з накопиченням іонів металу на поверхні денатурованого білка і появою позитивного заряду на білковій молекулі.

1. В три пробірки додати по 5 крапель білка.

2. В першу пробірку додати 1 краплю 10% р-ну СuSО₄, в другу - краплю 5% р-ну ацетату свинцю, в третю – 1 краплю 5% р-ну нітрату срібла. В усіх пробірках випадає осад.

3. В першу пробірку додати 10 крапель (надлишок) 10% р-ну СuSО₄ і відмітити розчинення осаду.

4. В другу пробірку додати 10 крапель (надлишок) 5% р-ну ацетату свинцю і відмітити розчинення осаду.

5. В третю пробірку додати 10 крапель ( надлишок) 5% р-ну нітрату срібла – осад не розчиняється.

6. Зробити висновки по всій роботі.