Лабораторна робота №6. Тема: Визначення впливу хімічних реагентів на структуру білків.

Мета роботи: Навчитись визначати білкову природу речовин за якісними реакціями та дослідити реакції осадження білків під впливом хімічних речовин- забруднювачів довкілля.

Теоретична частина

З точки зору біохімії життя на Землі – це існування білкових організмів. Білки виконують різноманітні функції в організмі :

транспортну ( гемоглобін), захисну( імуноглобуліни, білки згортання крові) , каталітичну (ферменти), скорочувальну ( білки м’язів), запасаючу

(альбумін), та ін. Білки є біополімерами, що мають кілька структур будови молекул. Первинна структура має вигляд поліпептидного ланцюга і утримується за рахунок пептидних зв’язків. Вторинна у вигляді спіралі утримується водневими зв’язками. При третинній структурі молекула білка набуває певної конфігурації в просторі – глобули за допомогою сульфідних та гідрофобних зв’язків. Четвертинна структура - поєднання кількох глобул за рахунок електростатичних зв’язків. Серед властивостей білків розрізняють загальні (денатурація, ренатурація, деструкція) та специфічні, зумовлені якісним складом амінокислот, що входять до складу білків та їх просторовим розміщенням в первинній структурі. Саме біохімічними властивостями білків пояснюється обмеження поширення живих організмів в певних регіонах Землі. Білки дуже чутливі до дії температурного фактора; підвищення температура вище 50^оС викликає денатурацію білка з послідуючою його деструкцією. Дія кислот, лугів, солей може також викликати денатурацію.

Кольорові реакції використовуються для встановлення білкової природи речовини, ідентифікації білків і визначення їх амінокислотного складу в різних біологічних рідинах.

ЧАСТИНА І

ЯКІСНІ РЕАКЦІЇ ДЛЯ ВИЗНАЧЕННЯ БІЛКІВ.

Матеріали та обладнання : яєчний білок, 10% р-н NаОН , 1% р-н СuSО₄ ; 0,5% р-н нінгідрину, концентровані кислоти : НNО₃ ,оцтова кислота, Н₂SО₄

Хід роботи

Перед виконанням роботи необхідно приготувати 1% розчин яєчного білку. Для цього яєчний білок фільтрують через марлю і розводять дистильованою водою у співвідношенні 1: 10.

Якісна реакція 1. Біуретова реакція на пептидний зв’язок.

В пробірку внести 5 крапель 1% р-ну яєчного білка, додати 3 краплі 10% р-ну NаОН і 1 краплю 1% р-н СuSО₄. Перемішати. Вміст пробірки набуває синьо-фіолетового забарвлення.

Якісна реакція 2. Нінгідринова реакція.

В пробірку внести 5 крапель 1% р-ну яєчного білка, додати 5 крапель 0,5% р-ну нінгідрину і нагріти до кипіння. З’являється розово-фіолетове забарвлення, яке через деякий час переходить в синьо-фіолетове.

Якісна реакція 3. Ксантопротеїнова реакція.

Суть реакції в нітруванні бензольного кільця циклічних амінокислот азотною кислотою з утворенням нітросполук, які випадають в осад. Реакція виявляє в білках наявність циклічних амінокислот.

В пробірку внести 5 крапель 1% р-ну яєчного білка, додати 3 краплі концентрованої НNО₃ і обережно нагріти. Роботу проводять під витяжною шафою. При нагріванні з’являється осад жовтого кольору. Після охолодження до осаду додають 10 крапель 10% р-ну NаОН – з’вляється оранжеве забарвлення.