46. Основные методы генетической трансформации.

1. Использование Ti -плазмид

Высокоэффективная система, но применима только для двудольных растений

2. Баллистический метод

Используется для широкого круга растений и тканей; достаточно простой метод

3. Использование векторов на основе вирусов

Неэффективный способ доставки ДНК в растительные клетки

4. Прямое введение генов в протопласты растений

Может использоваться для введения генов только в протопласты растительных клеток

5. Введение ДНК с помощью микроинъекций

Имеет ограниченное применение, поскольку единовременно инъекцию можно сделать только в одну клетку

6. Электропорация

Применяется для введения генов только в протопласты, из которых могут быть регенерированы целые растения

7. Слияние липосом

Применяется для введения генов только в протопласты, из которых могут быть регенерированы целые растения

Использование Ti –плазмид из Agrobacterium tumefaciens

1. Получение штамма бактерии с векторной конструкцией

2. Перенос стерильных листовых дисков либо других растительных объектов в жидкую среду, содержащую агробактерии

3. Заражение клеток раневой поверхности эксплантов и встраивание Т-ДНК с выбранным геном

4. Перенос эксплантов на среду с антибиотиком, что приводит к избирательной гибели клеток агробактерий

5. Культивирование эксплантов на среде с фитогормонами для индукции регенерации или каллусообразования в присутствии антибиотика/гербицида для проведения селективного отбора трансформированных клеток

6. Регенерация растений

Баллистический метод

• Золотые или вольфрамовые сферические частицы диаметром 0,4-1,2 мкм покрывают ДНК, осажденной хлоридом кальция или ПЭГ, и «выстреливают» ими в клетки из специального «ружья», приводимого в действие сжатым воздухом или гелием.

• Частицы разгоняются до скорости 300-600 м/с и пробивают клеточную стенку и мембраны растительной клетки. Попав в клетку, ДНК, покрывающая частицы, интегрируется в растительную ДНК.

Частота трансформации повышается при использовании линейной, а не кольцевой ДНК

47. Принципы конструирования генов для их экспрессии в других видах.

??????????? ничего не нашла (((

48. Химеры.

Создаваемые генными инженерами рекомбинантные ДНК называют химерными. Они были созданы для самых разнообразных целей, в том числе и для целенаправленого воздействия на ВИЧ.

Химеры в биологии, организм или его часть, состоящие из генетически разнородных тканей. Впервые термин применил немецкий ботаник Г. Винклер (1907) для форм растений, полученных в результате сращивания паслёна и томата. В дальнейшем (1909) Э. Баур, изучая пеларгонию пестролистную, выяснил природу Х. Различают Х. мозаичные (гиперхимеры), в которых генетически разные ткани образуют тонкую мозаику, секториальные, разнородные ткани в которых расположены крупными участками, периклинальные — ткани лежат слоями друг над другом, и мериклинальные — ткани состоят из смеси секториальных и периклинальных участков. Х. могут возникать в результате прививок растений и под влиянием мутаций соматических клеток. Компоненты Х. могут отличаться друг от друга генами ядра, числом хромосом или генами пластид и др. элементов цитоплазмы. Рисунок листа периклинальных Х. зависит от числа слоев меристематической ткани точки роста, принимающих участие в образовании листа. У двудольных растений мякоть края листа чаще всего образована вторым слоем (диплохламидные Х., например пеларгония с белоокаймлёнными листьями), у однодольных — край листа образован первым слоем (гаплохламидная Х., например хлорофитум с белоокаймлёнными листьями) (см. рис.).

Потомство Х. соответствует ткани, из которой оно происходит. Генеративные клетки растений возникают из второго слоя точки роста, поэтому потомство периклинальных Х. соответствует генотипу этого слоя. Взаимодействие между компонентами Х. и переход различных веществ из одного компонента в другой приводят к аномалиям развития и иногда к бесплодию Х. В определённых условиях (особенно у прививочных Х.) участки хромосом могут переходить из одного компонента в другой и включаться в хромосомы его клеток, изменяя признаки растения.

В садоводческой практике многие Х., возникшие случайно в результате прививок (т. н. пестролистность), продолжают разводить из поколения в поколение (например, Х. между померанцем и лимоном, а также между пурпурным ракитником и золотым дождём — т. н. ракитник Адама). В исследованиях используют различные Х. между мушмулой и боярышником. Пример Х. у животных — телята одного помёта, имеющие в крови смесь красных кровяных телец разных групп крови.

Гибридный белок (англ. fusion protein, также химерный, составной белок) — белок, полученный объединением двух или более генов, изначально кодировавших отдельные белки. Трансляция гибридного гена приводит к синтезу белка, который может сочетать некоторые функциональные свойства обоих исходных белков.Рекомбинантные гибридные белки создаются искусственно с помощью техник рекомбинации ДНК.