6. Принципы и методы выделения чистых культур аэробных бактерий

 Методы выделения чистых культур аэробов. Процесс выделения чистой культуры можно разделить на несколько этапов. Первый этап. Из исследуемого материала готовят мазок, окрашивают его по Граму или другим методом и микрсгскопиру-ют. Для посева исследуемый материал в случае необходимости разводят в пробирке со стерильным изотоническим раствором хлорида натрия. Одну каплю приготовленного разведения нано¬сят петлей на поверхность питательного агара в чашку Петри и тщательно втирают шпателем в среду, равномерно распределяя материал по всей ее поверхности. После посева чашку перевора¬чивают дном кверху, подписывают и помещают в термостат при температуре 37 °С на 18—24 ч. Второй этап. Просматривают чашки и изучают изолиро¬ванные колонии, обращая внимание на их форму, величину, кон¬систенцию и другие признаки. Для определения морфологии кле¬ток и их тинкториальных свойств из части исследуемой колонии готовят мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют. Для выделения и накопления чистой культуры одну изолированную колонию или несколько различных изолированных колоний пе¬ресевают в отдельные пробирки со скошенным агаром или какой-либо другой питательной средой. Для этого часть колонии сни-мают петлей, не задевая соседние колонии. Третий этап: Отмечают характер роста выделенной чис¬той культуры. Визуально чистая культура характеризуется однородным ростом. При микроскопическом исследовании окрашен¬ного мазка, приготовленного из такой культуры, в нем обнару¬живаются морфологически и тинкториально однородные клетки. Очнако в случае выраженного полиморфизма, присущего неко¬торым видам бактерий, в мазках из чистой культуры наряду с типичными встречаются и другие формы клеток. Для того, чтобы выделить чистую культуру микроорганизмов, следует отделить многочисленные бактерии, которые находятся в материале, одна от другой. Это можно достичь с помощью методов, которые основаны на двух принципах – механическом и биологическом разобщении бактерий.

 

Механический принцип	Биологический принцип
МЕТОДЫ 1. Фракционных разведений Л. Пастера 2. Пластинчастых разведений Р. Коха 3. Поверхностных посевов Дригальського 4. Поверхностных штрихов	МЕТОДЫ Принимают во внимание: а - тип дыхания (метод Фортнера); б - подвижность (метод Шукевича); в - кислотоустойчивость; г - спорообразование; д - температурный оптимум; е  -  избирательную  чувствительность лабораторных животных к бактериям

7. Международная классификация и характеристика ферментов бактерий. Методы определения гликолитических и протеолитических ферментов бактерий. Идентификация бактерий по фер­ментативной активности

• оксидоредуктазы – окислительно-восстановительные ферменты (к ним относятся дегидрогеназы, оксидазы и др.);

• трансферазы, переносящие отдельные радикалы и атомы от одних соединений к другим;

• гидролазы, ускоряющие реакции гидролиза, т.е. расщепление веществ на более простые с присоединением молекулы воды (эстеразы, фосфатазы, глюкозидазы и др.);

• лиазы, отщепляющие от субстрата химические группы негидролитическим путем (карбоксилазы и др.);

• изомеразы, превращающие органические соединения в их изомеры (фосфогексоизомераза и др.);

• лигазы, или синтетазы, ускоряющие синтез сложных соединений из более простых (аспарагинсинтетаза, глутаминсинтетаза и др.).

• Эндоферменты и экзоферменты. Внутриклеточные ферменты, объединенные структурно и функционально, составляют мультиферментные комплексы, например ферменты дыхательной цепи, локализованные на ЦПМ.

• Конститутивные и индуцибельные (адаптивные) ферменты.

• Ферменты агрессии разрушают ткань и клетки (гиалуронидаза, коллагеназа, ДНКаза, нейраминидаза, лецитовителлаза и др.).

• Гликолитические ферменты. Микроорганизмы могут расщеплять углеводы до кислоты или до кислоты и газа. Эти конечные продукты и определяют при помощи дифференциально-диагностических сред.

• Протеолитические ферменты бактерий определяют по разжижению желатина и продуктам разложения белка (аминокислот) – индола, сероводорода, аммиака