Вопрос 22. Типы ферментативных реакций. Механизмы 2-хсубстратаых реакций. Механизм ферментативного действия пиридоксаль-зависимого фермента аланинаминотрансферазы.
Односубстратная
AB= A + B односубстратные 2-хпродуктные
A→B односубстратные однопродуктные (изомеризация)
Двусубстратные (большинство)
AB↔CD
В зависимости от последовательности
По механизму протекания
Механизм двойного замещения («пинг-понг»)
п
оследовательный
механизм
М
еханизмы
ферментативного действия
аланиламинотрансфеназы
Общие черты активного центра:
А.ц. формируется из участков пептидной цепи и отдельных аминокислотных остатков, содержащих разные функциональные группы. Субстрат, соединяется с активным центром в нескольких точках; это обеспечивает высокую избирательность связывания (комплементарность субстрата и активного центра) и ориентацию субстрата и а.ц.) и ориентацию субстрата, необходимую для катализа реакции.
А.ц. как правило располагается в углублении (в нише, в щели) поверхности фермента. В результате субстрат, соединяясь с а.ц., оказывается не в водной среде цитозоля клетки, а в специфическом окружении функциональных групп а.ц.
В ходе присоединения субстрата и в ходе катализа происходят конформационные изменения молекулы фермента и субстрата. До взаимодействия пространственная структура структура субстрата и а.ц. лишь приблизительно соответствовали друг другу; строгая комплементарность возникает в процессе взаимодействия в результате изменений конформации (индуцированное соответствие). Конформационные изменения могут способствовать растягиванию разрываемой связи или, наоборот,сближению молекул при реакциях синтеза и тем самым вносят вклад в ускорение реакции.
Вопрос 23. Кинетика ферментативных реакций. Единицы активности. Измерения скорости реакции. Порядок реакции.
Кинетика- учение о скоростях.
Скорость ферментативных реакций определяется посредством введения прореагировавших веществ за определенное время при определенных условиях. Измеряют по убыли субстрата S или приросту продукта P за единицу времени. Зависит от активности фермента. Активность фермента выражается в ед. ферментативной активности. Каталитическая активность фермента катализирует 1 моль субстрата за 1 сек. Моль/сек (кат). Хмкмоль/сек*л – Х мкмлоь субстрата, преобразованные в 1 л. За 1 сек. E=ME+мкмоль/мин.
Активность ЛДГ. 120 U/L 1мкат/л=60 U/L Xмкат/л= 120 U/L
Удельная активность фермента
Молекулярная активность фермента.
В образце содержится 0,0014 мкмоль ацетилхолинэсткразы, активность 420 мкмоль/сек. Мол акт = (420 МКМОЛЬ/МИН)/ 0,0014мкмоль= 300000мин-1. Указывает сколько молекул субстрата превращается 1 молекулой фермента за 1 мин. Измерение скорости ферм. Акт по убыли субстрата
Порядок реакции определяется характером ее зависимости от концентарции субстрата.
ПОРЯДОК РЕАКЦИИ по данному в-ву, показатель степени при концентрации этого в-ва в кинетич.. ур-нии р-ции. Согласно действующих масс закону, скорость у простой (одностадийной) р-ции между в-вами А и В.
