59. Реакции агглютинации. Компоненты, механизм, способы постановки, применение. Реакция непрямой гемагглютинации. Реакция Кумбса. Реакция коагглютинации. Реакция торможения гемагглютинации.

Реакция агглютинации — РА (от лат. aggluti- natio — склеивание) — простая по постановке реакция, при которой происходит связыва¬ние антителами корпускулярных антигенов (бактерий, эритроцитов или других клеток, нерастворимых частиц с адсорбированными на них антигенами, а также макромолекулярных агрегатов). Она протекает при наличии электролитов, например при добавлении изо¬тонического раствора натрия хлорида.

Применяются различные варианты реакции агглютинации: развернутая, ориентировоч-ная, непрямая и др. Реакция агглютинации проявляется образованием хлопьев или осад¬ка

РА используют для:

• определения антител в сыворотке крови боль¬ных, например, при бруцеллезе (реакции Райта, Хеддельсона), брюшном тифе и паратифах (реак¬ция Видаля) и других инфекционных болезнях;

• определения возбудителя, выделенного от больного;

• определения групп крови с использова¬нием моноклональных антител против алло- антигенов эритроцитов.

Для определения у больного антител ставят развернутую реакцию агглютинации: к разве¬дениям сыворотки крови больного добавля¬ют диагностикум (взвесь убитых микробов,) и через несколько часов инкубации при 37 °С отмечают наибольшее разведение сыворотки (титр сыворотки), при котором произошла агглютинация, т. е. образовался осадок.

Характер и скорость агглютинации зави¬сят от вида антигена и антител. Примером являются особенности взаимодействия диагностикумов (О- и Я-антигенов) со специ-фическими антителами. Реакция агглютина¬ции с О-диагностикумом (бактерии, убитые нагреванием, сохранившие термостабильный О-антиген) происходит в виде мелкозернис¬той агглютинации. Реакция агглютинации с Н-диагностикумом (бактерии, убитые фор¬малином, сохранившие термолабильный жгу¬тиковый Н-антиген) — крупнохлопчатая и протекает быстрее.

Если необходимо определить возбудитель, выделенный от больного, ставят ориентиро¬вочную реакцию агглютинации, применяя диа¬гностические антитела (агглютинирующую сыворотку), т. е. проводят серотипирование возбудителя. Ориентировочную реакцию проводят на предметном стекле. К капле диа¬гностической агглютинирующей сыворотки в разведении 1:10 или 1:20 добавляют чистую культуру возбудителя, выделенного от больно¬го. Рядом ставят контроль: вместо сыворотки наносят каплю раствора натрия хлорида. При появлении в капле с сывороткой и микроба¬ми хлопьевидного осадка ставят развернутую реакцию агглютинации в пробирках с увели-чивающимися разведениями агглютинирую¬щей сыворотки, к которым добавляют по 2—3 капли взвеси возбудителя. Агглютинацию учитывают по количеству осадка и степени просветления жидкости. Реакцию считают положительной, если агглютинация отмеча-ется в разведении, близком к титру диагнос¬тической сыворотки. Одновременно учитыва-ют контроли: сыворотка, разведенная изото¬ническим раствором натрия хлорида, должна быть прозрачной, взвесь микробов в том же растворе — равномерно мутной, без осадка.

Разные родственные бактерии могут агглю¬тинироваться одной и той же диагностической агглютинирующей сывороткой, что затрудня¬ет их идентификацию. Поэтому пользуются адсорбированными агглютинирующими сыво¬ротками, из которых удалены перекрестно реагирующие антитела путем адсорбции их родственными бактериями. В таких сыво-ротках сохраняются антитела, специфичные только к данной бактерии. Получение таким споособом монорецепторных диагностических агглютинирующих сывороток было предло¬жено А. Кастелляни (1902). Реакция непрямой (пассивной) гемагглюти¬нации (РНГА, РПГА) основана на использо¬вании эритроцитов с адсорбированными на их поверхности антигенами или антителами, взаимодействие которых с соответствующими антителами или антигенами сыворотки крови бальных вызывает склеивание и выпадение эритроцитов на дно пробирки или ячейки в виде фестончатого осадка (рис. 13.2). При отрицательной реакции эритроциты оседают ■ виде «пуговки». Обычно в РНГА выявляют антитела с помощью антигенного эритроцитарного диагностикума, который представ¬ляет собой эритроциты с адсорбированными на них антигенами. Иногда применяют анти- -ельные эритроцитарные диагностикумы, на которых адсорбированы антитела. Например, можно обнаружить ботулинический токсин, добавляя к нему эритроцитарный антитель¬ный ботулинический диагностикум (такую реакцию называют реакцией обратной непря¬мой гемагглютинации — РОНГА). РНГА при¬меняют для диагностики инфекционных бо-лезней, определения гонадотропного гормона в моче при установлении беременности, для выявления повышенной чувствительности к лекарственным препаратам, гормонам и в не¬которых других случаях.

РЕАКЦИЯ КУМБСА

(Coombs test) - метод определения резус-антител на поверхности эритроцитов, которые вызывают осаждение глобулинов в сыворотке крови. Данный тест используется для диагностики гемолитической анемии у младенцев с резус-несовместимостью, у которых наблюдается разрушение эритроцитов.

Реакция коагглютинации. Клетки возбуди¬теля определяют с помощью стафилококков, предварительно обработанных иммунной диагностической сывороткой. Стафилококки, содержащие белок А, имеющий сродство к Fc-фрагменту иммуноглобулинов, неспеци-фически адсорбируют антимикробные анти¬тела, которые затем взаимодействуют актив-ными центрами с соответствующими микро¬бами, выделенными от больных. В результате коагглютинации образуются хлопья, состо¬ящие из стафилококков, антител диагности-ческой сыворотки и определяемого микроба.

Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) основана на блокаде, подавлении ан-тигенов вирусов антителами иммунной сы¬воротки, в результате чего вирусы теряют свойство агглютинировать эритроциты (рис. 13.3). РТГА применяют для диагностики мно¬гих вирусных болезней, возбудители которых (вирусы гриппа, кори, краснухи, клещево¬го энцефалита и др.) могут агглютинировать эритроциты различных животных.

61. Реакции преципитации. Механизм, компоненты, способы постановки, применение. Реакция иммунодиффузии. Иммуноэлектрофорез. Иммунная электронная микроскопия.

62. Реакции с участием комплемента. Реакция связывания комплемента. Механизм, компоненты, способы постановки, применение. Реакция радиального гемолиза.

63. Реакции нейтрализации. Механизм, компоненты, способы постановки, применение. Реакция нейтрализации токсина антитоксином.

64. Реакция иммунофлюоресценции. Механизм, компоненты, применение. Прямой и непрямой методы постановки.

65. Иммуноферментный анализ, радиоиммунный анализ, иммуноблоттинг. Механизм, компоненты, применение.

66. Иммунопрофилактика и иммунотерапия в медицинской практике. Общая характеристика и классификация иммунобиологических препаратов.

67. Вакцины. Определение. Современная классификация вакцин. Требования, предъявляемые к вакцинным препаратам.

68. Живые вакцины, примеры. Диагностикумы. Получение, применение. Достоинства и недостатки.

69. Инактивированные (убитые) вакцины. Анатоксины. Получение, применение. Достоинства и недостатки. Роль адъювантов.

70. Молекулярные вакцины. Генно-инженерные вакцины. Принципы получения, применение.

71. Ассоциированные и комбинированные вакцинные препараты. Массовые способы вакцинации. Условия эффективности применения вакцин. Национальный календарь прививок.

72. Иммунобиологические препараты на основе специфических антител. Классификация, применение. Способы получения.

73. Иммунные сыворотки, классификация. Получение, очистка, применение. Антитоксические сыворотки, получение, очистка, титрование, применение. Осложнения при использовании и их предупреждение. Понятие об иммуномодуляторах.

74. Препараты иммуноглобулинов. Моноклональные антитела. Интерфероны. Получение, очистка, показания к применению.