
- •Практикум по микробиологии Учебно-практическое издание
- •Содержание
- •Введение
- •Правила работы в микробиологической лаборатории
- •Ведение лабораторных записей
- •Методы микроскопического исследования микроорганизмов
- •Методы микроскопии
- •Морфология бактерий
- •Содержание лабораторной работы Задание 1. Приготовление препаратов для прижизненного исследования микроорганизмов
- •Задание 2. Приготовление фиксированного мазка микроорганизмов и изучение при помощи иммерсионной системы микроскопа
- •Задание 3. Изучение различных морфологических групп микроорганизмов
- •Контрольные вопросы
- •Наиболее часто используемые красители
- •Внутриклеточные включения
- •Клеточные структуры
- •Содержание лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •1.3. Морфологические особенности и ультраструктура актиномицетов, спирохет, риккетсий, хламидий и микоплазм Цель занятия
- •Основные сведения
- •Контрольные вопросы
- •1.4 Морфологические особенности и ультраструктура микроскопических грибов и простейших Цель занятия
- •Основные сведения
- •Содержание лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Условия культивирования микроорганизмов
- •Пищевые потребности микроорганизмов и требования к питательным средам
- •Классификация питательных сред
- •Этапы приготовления питательных сред
- •Содержание лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Методы посева биологического материала
- •Содержание лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Методы дезинфекции
- •Методы антисептики
- •Содержание лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Морфологическая характеристика
- •Культуральные свойства
- •Содержание лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •3.2. Физиолого-биохимические свойства микроорганизмов Цель занятия
- •Основные сведения
- •Физиологические особенности микроорганизмов
- •Биохимические свойства микроорганизмов
- •Содержание лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •3.3. Определение чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам Цель занятия
- •Основные сведения
- •Определение чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам методом дисков (диффузионный тест)
- •Количественное определение чувствительности бактерий к антимикробным препаратам методом серийных разведений.
- •Микротест–системы для определения чувствительности к антимикробным препаратам
- •Количественное определение чувствительности бактерий к антимикробным препаратам с помощью е–теста
- •Содержание лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •3.4. Изучение патогенности и вирулентности микроорганизмов. Работа с лабораторными животными Цель занятия
- •Основные сведения
- •Бактериоскопические методы
- •Биохимические методы
- •Биологические методы
- •Содержание лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Содержание лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •4.2. Микрофлора воды Цель занятия
- •Основные сведения
- •Микрофлора природных вод
- •Микробиологический анализ образцов воды
- •Гигиенические и санитарно-бактериологические требования к питьевой воде
- •Нормативы питьевой воды по микробиологическим показателям (СанПин 2.1.4.559-96.)*
- •Содержание лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •4.4. Микрофлора воздуха Цель занятия
- •Основные сведения
- •Микробиологический анализ воздуха
- •Содержание лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Микрофлора лекарственного сырья и готовых лекарств
- •Содержание лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Методы оценки неспецифической защиты организма
- •Дифференцировка лимфоцитов на кластеры дифференциации по поверхностным cd-маркерам
- •Количественное содержание лейкоцитов в циркулирующей крови здоровых людей
- •Анализ функциональной активности т- и в-лимфоцитов
- •Определение концентрации иммуноглобулинов четырех основных изотипов
- •Содержание лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •5.2.Методы оценки иммунного ответа Цель занятия
- •Основные сведения
- •Содержание лабораторной работы
- •Контрольные вопросы
- •Библиографический список
- •Состав наиболее часто используемых питательных сред
- •Для выращивания патогенных кокков
- •Для выращивания бактерий кишечной группы (одновременно являются дифференциально-диагностическими)
- •3. Для выращивания патогенных анаэробов
- •4. Для выращивания холерного вибриона
- •5. Для выделения возбудителя дифтерии
- •Для выявления сахаролитических свойств.
- •Среды для выявления протеолитических и гемолитических свойств.
Для выращивания бактерий кишечной группы (одновременно являются дифференциально-диагностическими)
Среда Левина. Состоит из мясо-пептонного агара (100 мл) с добавлением лактозы (2 г), двуосновного фосфата калия (0,2 г) и красителей (2 мл 0,5 % водного р-ра метиленового синего и 1,5 мл 2 % р-ра эозина желтого). Готовая среда имеет красно-фиолетовый цвет.
Среда Плоскирева. Предназначены для выделения бактерий тифопаратифозной и дизентерийной групп. Состав: питательный агар, лактоза, соли желчных кислот, бриллиантовый зеленый, минеральные соли и индикатор – нейтральный красный. Среда подавляет рост многих микроорганизмов (бактерий группы кишечной палочки). Лактозоположительные бактерии образуют на этой среде красные колонии.
Висмут-сульфит агар. Состав: триптический гидролизат кильки, глюкоза, бриллиантовый зеленый, неорганические соли, агар. Среда предназначена для выращивания сальмонелл., которые способны продуцировать сероводород
3. Для выращивания патогенных анаэробов
Среда Кита-Тароцци. К пептонному бульону добавляют кусочки свежей говяжей печени (по 1–1,5 г) в соотношении 3:1 и кипятят 30 минут. Затем бульон отфильтровывают, печень промывают под струей воды на сите. Отфильтрованный бульон разливают по 7–10 мл в пробирки, в каждую кладут по 4–5 кусочков отмытой печени, сверху заливают слоем вазелинового масла и стерилизуют в автоклаве.
Среда Вильсон-Блера. Состоит из 3 % питательного агара (100 мл), глюкозы (1 г), 20 % р-ра сульфита натрия (10 мл) и 8 % р-ра хлорида железа (1 мл). Анаэробные клостридии на этой среде образуют колонии черного цвета за счет восстановления сульфита натрия в сульфид натрия, который, соединяясь с хлоридом железа, дает осадок сульфида железа черного цвета.
4. Для выращивания холерного вибриона
Щелочной агар. Это питательный агар (см. выше) с рН 7,8.
5. Для выделения возбудителя дифтерии
Среда Леффлера. Состав: сахарный бульон и лошадиная сыворотка в соотношении 1:3.
ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНО-ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ СРЕДЫ
Для выявления сахаролитических свойств.
Среда Эндо. Состоит из мясо-пептонного агара (100 мл) с добавлением лактозы (1г), спиртового раствора основного фуксина (2–3 мл) и 10 % раствора сульфида натрия (до обесцвечивания фуксина). Горячая среда должна иметь бледно-розовый цвет, при застывании становится бесцветной. Среду готовят в день использования. Бактерии кишечной группы при росте на такой среде ферментирует лактозу с образованием альдегидов. Вследствие этого бесцветная фуксин-сернистая кислота переходит в альдегид-сернистое соединение с образованием фуксина, который окрашивает колонии кишечной палочки в красный цвет с металлическим блеском.
Среды Гисса (пестрый ряд). Состоят из питательного агараили или бульона (100 мл) с добавлением 1 % р-ра различных сахаров (лактозы, глюкозы, мальтозы, маннита, сахарозы) и красителя бромтимолового синего или индикатора Андреде (кислый фуксин в 1 н. р-ре гидроксида натрия). Готовые среды синего цвета (с индикатором Андреде бесцветные). При ферментации соответствующего сахара бактериями выделяются кислоты и цвет среды изменяется на зеленый затем на желтый (среды с индикатором Андреде краснеют).
Среда Ресселя. Применяется при изучении биохимических свойств энтеробактерий. Состав: питательный агар, лактоза, глюкоза и индикатор бромтимоловый синий. Приготавливают в виде столбика со скошенной поверхностью. Цвет готовой среды травянисто-зеленый. Посев исследуемого микроорганизма делают по скошенной поверхности и уколом в столбик. Бактерии, ферментирующие глюкозу до кислоты, изменяют окраску столбика среды в желтую, скошена поверхность при этом приобретает синий цвет. Лактозоположительные микроорганизмы изменяют цвет столбика и скошенной части в желтый. Бактерии, выделяющие при жизнедеятельности вещества основного характера, изменяют цвет среды в синий.