Определение концентрации иммуноглобулинов четырех основных изотипов

Содержание в сыворотке крови иммуноглобулинов четырех основных изотипов (IgG, IgM, IgA, IgE) определяют, пользуясь наборами специфических антисывороток или МКАТ, полученных против изотип-специфических антигенов этих иммуноглобулинов. Для определения количественного содержания иммуноглобулинов разных изотипов в биологических жидкостях используют радиальную иммунодиффузию (по Манчини), твердофазный ИФА или РИА, метод иммунотурбидометрии.

Радиальная иммунодиффузия по Манчини. В геле, содержащем специфическую антиглобулиновую антисыворотку, делают лунки, которые заполняют исследуемыми сыворотками. Из лунок молекулы иммуноглобулинов диффундирую в гель и образуют кольца преципитации с соответствующими антииммуноглобулиновыми антителами. Количественное содержание иммуноглобулинов устанавливают по диаметру колец преципитации.

Содержание лабораторной работы

Задание 1. Оценка фагоцитарной активности лимфоцитов по методу Н. В. Пучкова.

Объект исследования – образец крови из локтевой вены. В стерильную центрифужную пробирку внести 0,6 мл 2 % раствора цитрата натрия, 0,3 мл образца крови (стерильно взятой из локтевой вены), 0,2 мл взвеси микроорганизмов. Смесь взбалтывают 5 минут и инкубируют в термостате при 37ºС в течение 30 минут, затем центрифугируют при 1500об/мин в течение 5–6 минут. Стерильной пастеровской пипеткой убирают слой плазмы в отдельную пробирку. Далее пастеровской пипеткой собирают лейковзвесь, готовят из нее 5–6 мазков. Фиксируют смесью Никифорова 5 минут, окрашивают по Романовскому-Гимзе в течение 15–20 минут. Микроскопируют с иммерсионной системой. Находят 100 лейкоцитов и анализируют в них активность фагоцитоза. Рассчитывают показатель фагоцитарной активности (процент фагоцитировавших клеток из числа сосчитанных нейтрофилов) и фагоцитарный индекс (среднее число микроорганизмов, поглощенных одним активным нейтрофилом).

Задание 2. Оценка завершенности фагоцитоза по методу В. М. Бермана и Е. М. Славской.

Объект исследования – образец крови. В центрифужную пробирку с 5–10 мл оксалата натрия и 0,5–1 мл крови добавляют взвесь микроорганизмов и помещают в термостат при 37ºС на 30 минут. Затем несколько капель взвеси наносят в чашку Петри на подсушенный 2 % питательный агар, втирают в поверхность агара стерильным шпателем и термостатируют при 37ºС (время инкубации устанавливают экспериментально). Затем готовят мазки-отпечатки, фиксируют смесью Никифорова и окрашивают по Романовскому-Гимзе. Считают показатель завершенного фагоцитоза (процент клеток с завершенным фагоцитозом на 100 просмотренных нейтрофилов).

Контрольные вопросы

1. С какой целью определяют иммунный статус пациента?

2. Какими методами определяют активность макрофагально-фагоци­тарного звена иммунитета?

3. С какой целью при определении активности фагоцитоза к исследуемой пробе крови добавляют взвесь микроорганизмов или латекс?

4. Какую информацию дают результаты НСТ-теста?

5. Какие признаки позволяют дифференцировать лимфоциты на кластеры?

6. С какой целью используется РБТЛ?

5.2.Методы оценки иммунного ответа Цель занятия

Знакомство с методами оценки иммунного ответа.