Контрольные вопросы

1. С какой целью изучают чувствительность микроорганизмов к антимикробным препаратам?

2. Какие методы используют для изучения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам?

3. В чем заключается диффузионный метод? Для каких микроорганизмов он не используется и почему?

4. Что такое МПК? Какими методами можно определить этот показатель?

5. Как оценивают результаты, полученные методом серийных разведений?

6. Какие экспресс-методы используют для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам?

3.4. Изучение патогенности и вирулентности микроорганизмов. Работа с лабораторными животными Цель занятия

Знакомство с методами изучения патогенности и вирулентности микроорганизмов, принципами работы с лабораторным животными..

Основные сведения

В основе возникновения и развития инфекционного процесса лежит взаимодействие паразита и хозяина. Последнее включает ряд стадий, в которых микроорганизмы приобретают способность вызывать патологические процессы в организме человека. Патогенность (генетически детерминированная способность вызывать заболевания) является полидетерминантным признаком. Каждый патогенный микроорганизм несет генетическую информацию об образовании различных факторов вирулентности. К основным из них относятся способность синтезировать экзо- и эндотоксины, ферменты агрессии, компоненты микробной клетки. Выявление факторов вирулентности является важным этапом при индикации и идентификации возбудителей заболеваний.

Патогенность и вирулентность микроорганизмов изучают при помощи нескольких методов: бактериоскопических, биохимических, биологических.

Бактериоскопические методы

Бактериоскопическими методами можно установить наличие факторов патогенности – являющихся морфологическими особенностями микроорганизмов или приводящими к их изменению. С их помощью можно обнаружить:

- слизистую капсулу (окрашиванием фиксированных мазков бактерий по методу Омелянского или Бурри-Гинса),

- корд-фактор у микобактерий – возбудителей туберкулеза (окашиванием фиксированных мазков чистой культуры, выращенной в жидкой среде, по Цилю-Нильсену),

- способность бактерий к адгезии (в мазках со слизистых оболочек, окрашенных по Романовскому-Гимзе, содержащих клетки эпителия),

- незавершенный фагоцитоз (в мазках крови или лейковзвеси, окрашенных по Романовскому-Гимзе).

Биохимические методы

С помощью биохимических методов проводят обнаружение экзоферментов -ферментов агрессии и экзотоксинов. Например:

- для обнаружения гиалуронидазы в пробирку с раствором гиалуроновой кислоты вносят культуру бактерий и инкубируют при 37ºС 15 минут (параллельно ставят контрольный опыт без внесения бактерий), затем в обе пробирки добавляют 2–3 капли концентрированной уксусной кислоты. Гиалуроновая кислота при добавлении уксусной кислоты образует сгусток. Следовательно, если бактерии выделяют гиалуронидазу, сгусток не образуется, а в контрольной пробирке – образуется;

- плазмокоагулазу выявляют в посевах исследуемой культуры микроорганизмов в стерильную цитратную плазму крови (в контрольном опыте в пробирку помещают только плазму). Посевы инкубируют при 37⁰С 2–5 часов. В случает выработки фермента происходит свертывание плазмы, в контроле она остается жидкой;

- гемолизины обнаруживают в посевах исследуемого микроорганизма на плотные среды с кровью (посевы инкубируют при 37ºС в течение суток) по образованию вокруг колоний прозрачных или зеленоватых (неполный гемолиз) зон гемолиза;

- лецитиназу выявляют в посевах микроорганизмов на питательный агар с лецитином. После суточного инкубирования вокруг колоний бактерий, выделяющих фермент, образуется зона помутнения с перламутровым блеском;

- для определения цитотоксинов бульонную культуру бактерий вносят в культуру чувствительных клеток. В положительном случае после инкубации наблюдают характерное цитопатическое действие (изменение формы и размеров клетки, появление вакуолей в цитоплазме, нарушение целостности клеточного монослоя).