Содержание лабораторной работы

Задание 1. Определение протеолитической активности и отношения к молекулярному кислороду

Объект исследования – выделенная чистая культура микроорганизма. Сделать посев культуры исследуемого микроорганизма (лучше с агаризованной среды) уколом стерильной иглой в столбик мясо-пептонной желатины и в столбик агаризованной среды. Результаты посева учесть на 3–4 день. Отметить характер роста, наличие, интенсивность и форму разжижения среды.

Задание 2. Определение способности к брожению.

Сделать стерильной иглой посев уколом культуры исследуемого микроорганизма в столбик углеводно-пептонной среды в 2 пробирки. После посева поверхность среды в одной пробирке залить расплавленным парафином. Результаты посева учесть через 2–7 суток.

Задание 3. Определение амилолитической активности.

Разлить стерильную среду в стерильные чашки Петри. Когда среда застынет, исследуемые микроорганизмы посеять штрихом по диаметру чашки Результаты учесть через 2–10 суток. Для этого на поверхность среды налить 3–5 мл раствора Люголя. Среда, содержащая крахмал, окрашивается в синий цвет, а зона гидролиза остается бесцветной или приобретает красно-бурую окраску, если крахмал гидролизовался до декстринов. Зону гидролиза крахмала измерить в миллиметрах от края штриха (колонии) до границы светлой зоны. Чем больше диаметр зоны, те выше амилолитическая активность микроорганизма.

Задание 4. Идентификация выделенного микроорганизма

Все изученные культуральные, морфологические и физиолого-биохимические признаки выделенного в чистую культуру микроорганизма свести в общую схему и по имеющемуся определителю сделать попытку определить его систематическое положение.

Схема описания культуры микроорганизмов

1. Источник, откуда был выделен микроорганизм.

2. Время выделения.

3. Схема выделения.

4. Морфология:

а) форма вегетативных клеток и их сочетания;

б) наличие слизистых капсул;

в) подвижность вегетативных клеток (в бульонной культуре);

г) окрашивание по методу Грама, кислотоустойчивость;

д) способность к спорообразованию);

5. Характер роста на плотной среде (характер поверхности, цвет, выделение пигмента в среду, оптические свойства, запах, консистенция).

6. Рост по уколу в желатину (характер роста, наличие и форма разжижения, запах, цвет, выделение пигмента в среду).

7. Наличие амилолитических и пептолитических ферментов.

8. Рост в жидкой среде (степень помутнения, наличие осадка или поверхностно плёнки, их характеристика).

9. Способность к брожению.

10. Отношение к кислороду.

11. Систематическое положение.

Контрольные вопросы

1. Что включает в себя характеристика физиолого-биохимических свойств?

2. Каким методом можно определить отношение культуры микроорганизма к молекулярному кислороду?

3. Какие биохимические особенности обычно определяют при лабораторном исследовании культуры микроорганизмов?

4. Какой рост по уколу в столбик агара дают микроаэрофилы и облигатные анаэробы?

5. Как определяют способность микроорганизмов к синтезу сахаролитических ферментов?

6. Как проводят определение амилолитических ферментов?

7. Как проводят определение протеолитических ферментов?

8. Какие питательные среды используют для определения амилолитических и пептолитических ферментов?

9. Каким способом можно определить способность микроорганизмов к брожению?