Методы посева биологического материала

Культивирование микроорганизмов осуществляется посевом их на питательные среды с последующей инкубацией в оптимальных условиях. С этой целью материал, содержащий микроорганизмы (материал от больного, из чистой культуры, из изолированной колонии и т.д.), помещают (засевают) в жидкие или на плотные питательные среды. При использовании плотных сред посев может быть произведен как на поверхность, так и в глубину среды. В зависимости от техники посева и концентрации микробов в посевном материале на поверхности плотной питательной среды возникает сплошной рост микробов (бактериальный «газон» или «сливной рост) или изолированные колонии.

Универсальным инструментом для производства посевов является бактериологическая петля. Кроме нее для посева уколом используют бактериологическую иглу, а для посевов на поверхность плотной среды в чашки Петри – металлические, стеклянные или пластмассовые шпатели. Для посевов жидкого материала могут быть использованы пастеровские и градуированные пипетки. Способ посева в среду зависит от ее консистенции, качества засеваемого материала и цели исследования. Все манипуляции с микробами осуществляют с помощью стерильных инструментов вблизи пламени горелки.

Посев на твердую питательную среду производят легким втиранием материала в поверхность среды, не повреждая ее. При посеве на скошенную поверхность плотной питательной среды петлю с посевным материалом вносят в конденсационную воду и скользящими движениями растирают его штрихом по поверхности среды снизу вверх, направляя штрих от одной стенки к другой.

При посеве в столбик плотной питательной среды иглой с посевным материалом прокалывают столбик по центру и осторожно вынимают, не повреждая получившийся канал.

При посеве в жидкую питательную среду петлю погружают в среду или материал, растирают на стенке сосуда, а потом смывают жидкой средой, слегка встряхивая пробирку.

При посеве на плотные питательные среды в чашки Петри используют следующие методы:

- посев петлей - посевной материал втирают петлей в поверхность плотной среды у края чашки Петри, затем снимают избыток материала, проколов петлей среду. Оставшийся на петле материал рассевают параллельными штрихами по поверхности среды. При этом достигается последовательное уменьшение количества микробов вплоть до единичных клеток;

- посев шпателем - материал наносят на поверхность среды петлей или пипеткой, затем стеклянным или металлическим шпателем тщательно и осторожно (чтобы не повредить поверхность среды) втирают в поверхность среды. При этом левой рукой придерживают слегка приоткрытую крышку и одновременно вращают чашку. При таком способе посева в зависимости от количества микробов в материале можно получить как изолированные колонии, так и сплошной газон. Можно нанести материал на крышку чашки Петри в конденсат, смешать шпателем с конденсатом, а затем втереть полученный раствор в поверхность среды (при таком приеме возрастает вероятность получить изолированные колонии микробов);

- посев тампоном - тампон с исследуемым материалом вносят в чашку с плотной питательной средой и круговыми движениями втирают его содержимое в поверхность среды, одновременно вращая чашку.