69. Определение орэ. Кдз

Осмотрическая резистентность Er - устойчивость эритроцитов в солевых растворах различной концентрации. Эритроциты в гипертонических солевых растворах сморщиваются, а в гипотонических – набухают и гемолизируются.

Изотоническим – физ. солевым р-ром для Эр является 0,85% раствор хлорида натрия.

Принцип: визуальное определение уровня минимальной и максимальной осмотической резистентности эритроцитов.

Ход методики:

1. В штатив установить 26 центрифужных пробирок;

2. Промаркировать пробирки соответственно концентрациям растворов, от 0,70 % до 0,20 % раствора NaCl, с интервалом 0,02 % .

3. Налить в пробирки по 1 мл растворов необходимой концентрации, пользуясь таблицей, начиная с меньшей концентрации 0,20 %;

4. Внести в каждую пробирку кровь по 20 мкл, начиная с большей конц. 0,70 %;

5. Перемешать содержимое пробирок и оставить на 30 минут или сутки;

6. Процентрифугировать пробирки 10 минут при 1500 об/мин;

7. Учесть результат:

• найти пробирку, где впервые появилось изменение цвета раствора с бесцветного на желтый – эта концентрация есть минимальная резистентность

• найти пробирку, где впервые исчез осадок из эритроцитов – эта концентрация есть максимальная резистентность.

«Определение осмотической резистентности эритроцитов фотометрическим методом»

Принцип: определение процента (%) гемолиза расчетным путем.

Реактивы: 1% раствор NaCl, дистиллированная вода.

Ход методики:

1. Установить в штатив 15 центрифужных пробирок;

2. Промаркировать пробирки соотв. к-ям р-ра хлорида натрия с интервалом в 0,05 %;

3. Налить в пробирки по 5 мл раствора NaCl, начиная с меньшей концентрации

0,1 %;

4. Внести в пробирки по 20 мкл крови, начиная с большей концентрации 1%;

5. Тщательно перемешать содержимое пробирок и оставить на 30 минут;

6. Отцентрифугировать пробирки при 1500 об/мин 10 минут;

7. Фотоколориметрировать на ФЭКе при зеленом светофильтре, в кювете на 10 мм против холостой пробы (1 % раствор NaCl) центрифугаты из пробирок с разными концентрациями;

8. Рассчитать % гемолиза эритроцитов

За 100% гемолиза принимают оптическую плотность раствора с 0,1 % NaCl

% гемолиза = Е_х * 100% / Е _0,1%;

где Е_х – оптическая плотность центрифугата исследуемых пробирок,

Е_0,1% - оптическая плотность центрифугата с 0,1% раствором NaCl

Диагностическое значение исследований

Минимальная резистентность в норме составляет

Для взрослых 0,48-0,46 % раствора хлорида натрия, для детей 0,48- 0,44%

Минимальная ОРЭ выше чем 0,48% наблюдается при гемолитической анемии новорожденных, при отравлении свинцом, туберкулезе, бронхопневмониях, малярии, лейкозах, циррозе печени, лимфогранулематозе, токсикозах.

Максимальная резистентность в норме составляет

Для взрослых 0,34 -32% раствора хлорида натрия

Для детей 0,36 –0,40% раствора хлорида натрия

Максимальная резистентность ниже 0,32% бывает после обширных кровопотерь, спленэктомии, гемоглобинозе С, застойных желтухах, железодефицитных анемиях.

Расширение границ ОРЭ (одновременное понижение минимальной и повышение максимальной резистентности) наблюдается в начале острого гемолитического криза, в остром периоде В₁₂-дефицитной анемии, микросфероцитозе.