67. Подсчёт и окраска тромбоцитов. Кдз. Морфология

Для подсчета тромбоцитов предложены прямые методы: подсчет в камере Горяева, с помощью гематологического анализатора и непрямые методы: подсчет в окрашенном мазке.

ПРИНЦИП: Метод основан на определении количества тромбоцитов в окрашенных мазках

крови на 1000 эритроцитов.

РЕАКТИВЫ: 6 % стерильный раствор ЭДТА или 14 % стерильный раствор сульфата магния;

метанол, краска Романовского.

ХОД МЕТОДИКИ

1. Прополоскать стерильный капилляр Панченкова 6 % раствором ЭДТА или 14 % сульфата магния.

2. Набрать в капилляр Панченкова 0,25 мкл (до метки 75) выше названных реактивов и внести в пробирку или на стекло с лункой.

3. Проколоть палец после соответствующей обработки и, не удаляя первой капли, набрать кровь в капилляр до метки «К».

4. Выпустить кровь в пробирку или лунку и тщательно перемешать.

5. Приготовить из смеси 3- 4 тонких мазка, высушить, подписать их.

6. Зафиксировать мазки в метаноле 5-10 минут.

7. Окрасить фиксированные мазки по Романовскому: при использовании 6 % ЭДТА 30-45 минут, при использовании 14 % сульфата магния 60 -120 минут.

8. Вырезать из бумаги ограничитель поля зрения, вставить его между верхними линзами окуляра.

9. Пользуясь иммерсионной системой микроскопа, найти в окрашенном мазке клеточные элементы: розовые эритроциты и мелкие фиолетовые тромбоциты.

10. В разных участках мазка подсчитать одновременно эритроциты и тромбоциты, записывая эритроциты и тромбоциты в отдельные столбики: Ег - , Тг -. Подсчет элементов закончить, насчитав 1000 эритроцитов.

11. Рассчитать количество тромбоцитов в 1 литре крови по формуле:

Х= А* В/1000,

где X – количество тромбоцитов в крови;

А - количество подсчитанных тромбоцитов в мазке;

В - количество эритроцитов в 1 л крови; 1000 - подсчитанные эритроциты в мазке.

НОРМА ТРОМБОЦИТОВ 180*10⁹/л -320*10⁹/л – по Фонио (150*10⁹/л - 450*10⁹/л – на анализаторе)

ТРОМБОЦИТОПЕНИЯ - отмечается при тромбоцитопенической пурпуре, гипопластических и апластических состояниях кроветворения, лучевой болезни, тяжелых поражениях печени, уремии, остром лейкозе, отравлении бензолом, при инфекционно-токсических и токсико-аллергических состояниях.

ТРОМБОЦИТОЗ - отмечается при ожогах, гемолитических кризах, после кровотечений, после спленэктомии, хроническом миелолейкозе, эритремии, остеомиелофиброзе, после физической

нагрузки.

Тромбоцит – кусочек цитоплазмы мегакариоцита. Неактивный тромбоцит имеет форму двояковыпуклой линзы. Центр – грануломер – содержит 5-15 зёрен азурофильной зернистости. Периферическая часть – гиаломер – голубого, розового или сиреневого цвета. Размер тромбоцита 1, 5-3 мкм. Активная форма – амёбовидная.

68. Методы подсчёта ретикулоцитов

ПРИНЦИП: выявление зернисто-сетчатой субстанции в эритроцитах при окраске щелочными красками (суправитально) с дальнейшим подсчетом их в мазке крови.

Методы взятия крови и окраска ретикулоцитов делятся на две группы: окраска непосредственно на стекле и окраска в пробирке.

МЕТОД ОКРАСКИ НА СТЕКЛЕ

Реактивы: 1. Насыщ. раствор бриллианткрезилблау (1,2 г краски на 100 мл абс. спирта).

2. Азур I (1,2 г краски на 100 мл абсолютного спирта).

3. Азур II (1,2 г краски на 100 мл абсолютного спирта). Ход методов

1. Каплю одной из красок нанести на предм. стекло стеклянной палочкой и сделать мазок. Место нанесения краски пометить стеклографом.

2. На мазке из краски приготовить мазок из крови и немедленно до высыхания крови поместить стекло во влажную камеру на 5 минут.

3. 3. Достать мазок из камеры и высушить на воздухе.

МЕТОД ОКРАСКИ В ПРОБИРКЕ Окраска по Алексееву

При этом методе одновременно окрашиваются тромбоциты и ретикулоциты. Краска Алексеева: азур II - 1 г, цитрат натрия – 5 г, хлорид натрия - 0,4 г, дист. вода – 45 мл. Смесь в колбе перемешать, оставить для вызревания на 4 суток при температуре 37°С, профильтровать. Ход метода

1. Набрать краску капилляром Панченкова 50 (25) делений, выпустить в центрифужную пробирку.

2. Набрать кровь в капилляр Панченкова до метки «К» 2 (1) раза, вылить в пробирку с краской (соотношение краски и крови 1:4).

3. Смесь крови и краски перемешать, пробирку закрыть влажным ватным тампоном и оставить для окрашивания на 20 - 30 минут в термостате при 37°С.

4. Приготовить мазок крови из смеси.

ТЕХНИКА ПОДСЧЕТА РЕТИКУЛОЦИТОВ

При любом варианте окраски эритроциты окрашиваются в желтовато-зеленый цвет, зернисто-сетчатая субстанция ретикулоцитов окрашивается в синий или фиолетовый цвет.

Независимо от метода окраски препараты микроскопируют с иммерсионной системой, с ограничителем поля зрения.

Ретикулоциты подсчитывают в 1000 эритроцитов (сколько ретикулоцитов содержится в 1000 эритроцитов). Результаты выражают в ‰

КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ

Норма ретикулоцитов составляет 2 -10 ‰

Количество ретикулоцитов в крови является показателем регенераторной функции костного

мозга в отношении эритропоэза, а также тестом эффективности лечения анемий.

Ретикулоцитопения - уменьшение количества ретикулоцитов. Она характерна для гипо-

апластических, В₁₂ деф., фолиеводефицитных анемий, лучевой болезни, голодания.

Ретикулоцитоз - увеличение количества ретикулоцитов. Он наблюдается при гемолитических анемиях, ГБН, острых постгеморрагических анемиях.

Пассивный ретикулоцитоз встречается при опухолях с метастазами в костный мозг. При этом барьерная функция костного мозга снижается, и ретикулоциты вымываются в периферическую кровь, количество эритроцитов и гемоглобина не увеличивается.

Активный ретикулоцитоз сопровождается увеличением количества эритроцитов и гемоглобина в крови.