64. Приготовление мазков крови. Фиксация

ТЕХНИКА ПРИГОТОВЛЕНИЯ МАЗКОВ КРОВИ

1. На предметное стекло нанести небольшую каплю крови, отступив от узкого края стекла 1,5 см;

2. Предметное стекло положить на стол или взять в левую руку его за узкие ребра;

3. В правую руку взять шлифованное стекло и разместить его перед каплей крови под углом 45°;

4. Сдвинуть шлифованное стекло на каплю крови и распределить кровь по ребру стекла;

5. Излишки крови удалить сухим ватным тампоном;

6. Быстрым легким движением, не надавливая, продвинуть шлифованное стекло справа налево до тех пор, пока не будет исчерпана вся капля крови;

7. Подождать пока мазок высохнет на воздухе и подписать его простым карандашом по крови, по середине, ближе к началу мазка.

ТРЕБОВАНИЯ, ПРЕДЪЯВЛЯЕМЫЕ К МАЗКУ

Мазок должен быть:

- равномерным, тонким, желтого цвета,

- занимать не менее 1/2 и не более 3/4 длины предметного стекла;

- заканчиваться «метелочкой».

ЦЕЛЬ ФИКСАЦИИ:

1. Прикрепить мазок к стеклу;

2. Предотвратить гемолиз эритроцитов водой, содержащейся в красках.

МЕТОДЫ ФИКСАЦИИ

1. Над пламенем горелки. Мазок несколько раз проводят над пламенем до высыхания препарата, в гематологии этот метод практически не используют.

2. На мостиках. Высохшие на воздухе мазки укладывают на мостик, наливают фиксатор на определенное время или до испарения фиксатора.

3. В емкости. Высохшие на воздухе мазки складывают попарно мазками наружу и опускают в специальную камеру или стакан для фиксации, наливают фиксатор на определенное время, затем достают мазки пинцетом и высушивают на воздухе.

ФИКСИРУЮЩИЕ ЖИДКОСТИ

ХЛОРОФОРМ - экспозиция фиксации несколько секунд;

ФОРМАЛИН - экспозиция фиксации 1 минута;

МЕТИЛОВЫЙ СПИРТ - экспозиция фиксации 5-10 минут;

ЭТИЛОВЫЙ СПИРТ - экспозиция фиксации 30 минут;

СМЕСЬ НИКИФОРОВА - экспозиция фиксации не менее 30 минут.

65. Методы окраски

ЦЕЛЬ ОКРАСКИ: дифференциация клеточных элементов, структур их ядер и цитоплазмы.

ПРИНЦИП методов окраски основан на химическом сродстве основных частей клеток к определенным анилиновым краскам. Кислые части клеток воспринимают основные красители (метиленовый синий, азур I, азур II), щелочные имеют сродство к кислым краскам (эозин).

ОКРАСКА ПО РОМАНОВСКОМУ

Реактивы: краска Романовского

1. Фиксированный мазок укладывают на мостик или складывают в емкость для окраски.

2. Мазок заливают разведенным по титру рабочим раствором краски Романовского, возможно более высоким слоем, без образования пузырей или полностью заполняют емкость краской.

3. Окрашивают мазок 20 - 45 минут в зависимости от температуры воздуха, титра краски.

4. После окончания окрашивания краску смывают сильной струей воды в течение

1-2 минут.

5. Мазок укладывают для просушивания в штатив или сушат фильтровальной бумагой. Правильно окрашенный мазок крови имеет розово-фиолетовый цвет.

ОКРАСКА ПО НОХТУ

Реактивы: азур II, эозин (водные растворы)

1. Перед началом работы приготовить смесь красок. На один мазок требуется 0,5 мл азура П, 0,5 мл эозина, 3 мл дист. воды.

2. На фиксированный мазок нанести приготовленную смесь и окрашивать 25- 45 минут в зависимости от температуры воздуха.

3. Мазок смыть проточной водой и высушить на воздухе.

Правильно окрашенный мазок крови имеет розово-фиолетовый цвет.

ОКРАСКА ПО КРЮКОВУ - ПАПЕНГЕЙМУ

Реактивы: фиксатор-краситель Май-Грюнвальда, свежеприготовленный рабочий раствор краски Романовского, нейтральная дист. вода.

1. На нефиксированный мазок налить краску-фиксатор Май-Грюнвальда на 3-5 минут.

2. По истечении времени на мазок налить дист. воды на 1- 2 минуты.

3. Смыть мазок водой и залить его раствором краски Романовского на 15- 20 минут.

4. Краску смыть большим количеством воды и высушить мазок на воздухе.

Правильно окрашенный мазок имеет розово-фиолетовый цвет.