«Определение количества белка в моче методом разведения»

ПРИНЦИП МЕТОДА: при наслаивании мочи на реактив образуется белковое кольцо, время образования кольца и его величина зависит от концентрации белка.

РЕАКТИВЫ: 50% раствор азотной кислоты или реактив Ларионовой.

ХОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ:

• подготовьте 2-3 градуированные центрифужные пробирки, пипетку объемом 1,0 мл, секундомер, черную бумагу, реактивы, дистиллированную воду.

• налейте в пробирку 1,0 мл (точно!) реактива.

• наслоите пипеткой на реактив мочу, содержащую белок, 1,0 мл (точно!). Соотношение 1:1.

• немедленно включите секундомер, наблюдайте за появлением белкового кольца, после чего выключите секундомер.

• отметьте, какое кольцо появилось: нитевидное, широкое или компактное.

• разведите исследуемую мочу в необходимое число раз в зависимости от типа кольца:

А) нитевидное – в 2 раза (1мл мочи и 1мл воды)

Б) широкое - в 4 раза (1мл мочи и 3мл воды)

В) компактное – в 10 раз (1мл мочи и 9мл воды)

• проделайте повторное наслоение с разведенной мочой.

• засеките время появления кольца.

• разводите мочу и наслаивайте до тех пор, пока нитевидное кольцо не появится в промежутке от конца первой минуты до конца 4 минуты, после чего наслоение и разведение прекратите.

• рассчитайте концентрацию белка в моче по формуле:

Х г/л = 0,033 г/л х степень разведения мочи х временная поправка

«ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИЧЕСТВА ГЛЮКОЗЫ В МОЧЕ ФЕРМЕНТАТИВНЫМ МЕТОДОМ»

РЕАКТИВЫ:

1. Рабочий реагент (смесь ферментов).

2. Стандарт глюкозы 5,55 ммоль/л, (16 ммоль/л).

3. Дистиллированная вода.

ПРИНЦИПЫ МЕТОДА: глюкоза в присутствии глюкозооксидазы окисляется с образованием окрашенного вещества, интенсивность окраски которого прямо пропорциональна концентрации глюкозы в моче.

ХОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ

Мочу перед исследованием необходимо развести в 5 или 10 раз в зависимости от качественной реакции, если жёлтый цвет в 5-7 раз, оранжевый – в 10 раз.

Отмерить (мл)	Опыт	Стандарт	Контроль
Моча	0,02	-	-
Стандарт глюкозы	-	0,02	-
Дистиллированная вода	-	-	0,02
Рабочий реагент	2,00	2,00	2,00

Реакционную смесь в каждой пробирке перемешать, проинкубировать 15 минут при t - 37⁰ в термостате или водяной бане. Стабильность окраски – 15 минут!

Измерить оптическую плотность опыта и стандарта против контроля при сине-зелёном или зелёном светофильтре (длина волны 490-540 нм), кювета – 5мм.

РАССЧИТАТЬ РЕЗУЛЬТАТ ПО ФОРМУЛЕ:

Соп = Еоп *Сст* степень разведения мочи / Ест = ммоль/л