Диагностика генетических нарушений

Если генетическое нарушение наследуется от женщины, то можно отобрать «здоровые» эмбрионы, пройдя процедуру тестирования только полярных телец, не трогая сам эмбрион. Также можно протестировать только бластомеры. Либо может проводиться последовательное изучение полярных телец, затем бластомеров.

Какая именно схема ПГД будет применяться для каждого конкретного случая, определяется на консультации с врачом-генетиком при планировании ПГД. Как правило в большинстве случаев проводится последовательный анализ сначала полярных телец, затем бластомеров. Это связано с тем, что включение в исследование полярных телец и бластомеров повышает точность и эффективность диагностики.

При первом делении мейоза овоцит 1-го порядка делится, в результате чего образуются овоцит 2-го порядка и небольшое первое редукционное тельце (обе клетки с диплоидным набором хромосом). При втором делении мейоза в результате деления овоцита 2-го порядка образуются одна яйцеклетка и второе редукционное тельце. Первое редукционное тельце иногда тоже делится на две одинаковые мелкие клетки. В результате этих преобразований овоцита 1-го порядка образуются одна яйцеклетка и три редукционных тельца, где и яйцеклетка, и редукционные тельца имеют гаплоидный набор хромосом. Таким образом можно исследовать полярные тельца, чтобы установить унаследовала ли яйцеклетка генетический дефект.

После оплодотворения яйцеклеток сперматозоидами в условиях эмбриологической лаборатории эмбрион развивается — клетки делятся. На третий день эмбрион состоит из 6-8 бластомеров. И именно на третий день происходит забор биологического материала для генетического исследования — т. н. «биопсия эмбрионов», то есть извлечение из эмбриона одного бластомера (а иногда также и полярных телец) с помощью специальных микроинструментов. Процедура не нарушает дальнейшего развития эмбриона. В то время пока выполняется генетическая диагностика, эмбрионы продолжают развиваться в соответствующей культуральной среде до переноса в полость матки на 5-е сутки развития. К этому времени эмбрион должен достичь стадии бластоцисты. Перед переносом эмбриолог оценивает строение и форму эмбрионов. Результат генетической диагностики сопоставляется с морфологией эмбрионов и делается заключение о том, какие эмбрионы рекомендуются для переноса в матку. Для переноса отбирают самые лучшие по морфологическим характеристикам эмбрионы без генетических нарушений.

Анализ проводится в очень сжатые сроки. Для анализа бластомеров доступно всего 2 суток, так как эмбрион не может продолжать своё развитие вне организма матери далее стадии бластоцисты (5-е сутки после оплодотворения), поэтому исследование обязательно должно быть выполнено за это короткое время.

Используемые генетические методы

1.Для числовых и структурных хромосомных нарушений применяется метод FISH (флуоресцентная гибридизация in situ).

2.При проведении ПГД моногенных заболеваний применяется метод ПЦР.

Метод флуоресцентной in situ гибридизации (FISH) — метод цитогенетического анализа, используемый для выявления и локализации присутствия специфицеских последовательностей ДНК хромосом. Так изучается не только морфология хромосом, но и последовательности ДНК, входящих в их состав. Используются ДНК-зонды, которые представляют собой нуклеотидную последовательность ограниченного размера комплементарную определённому участку ядерной ДНК исследуемого цитогенетического препарата. Зонд несет «метку», то есть содержит нуклеотиды, связанные с флуорофором (молекула, способная к флуоресценции). Таким образом при помощи флуоресцентной микроскопиинаблюдается свечение специфицеских последовательностей ДНК хромосом. Полимеразная цепная реакция — метод основан на многократном избирательном копировании определённого участка ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях (in vitro). При этом происходит копирование только того участка, который удовлетворяет заданным условиям, и только в том случае, если он присутствует в исследуемом образце.

Преимущества преимплантационной диагностики

-Выбор и перенос в матку только тех эмбрионов, которые не имеют хромосомных патологий

-Снижение риска рождения ребёнка с определёнными генетическими дефектами

-Снижение риска невынашивания (примерно в 2 раза)

-Снижение риска многоплодия (примерно в 2 раза)

-Увеличение шанса на успешную имплантацию (примерно на 10 %)

-Увеличение шансов на благополучное рождение ребёнка (примерно на 15-20 %).

Риск при проведении преимплантационной диагностики

Риск случайного повреждения эмбриона (<1 %)

Ошибочная диагностика (до 10 %)