5.3.1 Приготовление смывов

Смывы с поверхности оборудования и предметов делают с помощью трафаретов площадью 1 и 5 см² из нержавеющего металла. Перед взятием пробы трафарет смачивают спиртом, поджигают и накладывают на поверхность исследуемого объекта. Стерильной марлевой салфеткой (или тампоном), смоченной 2 мл стерильной воды, тщательно протирают поверхность, ограниченную трафаретом. Затем салфетку помещают в колбочку с 8 мл стерильной воды. Далее площадь протирают вторым сухим тампоном и опускают его в ту же колбочку. Тампоны взбалтывают в стерильной воде от 5 до 10 мин, чтобы отмыть попавшие на них микроорганизмы.

Смывы с поверхности предметов содержат 10 мл стерильной воды (2 мл для увлажнения салфетки, 8 мл доливают к смывам), поэтому исходный смыв уже разведен 1:10.

Для определения общего количества микробов из колбы берут 1 мл смывной воды и заливают МПА (расплавленным и охлажденным до температуры 45 ºС), перемешивают в бактериологической чашке и после застывания ставят в термостат при температуре 37 ºС на двое суток.

При бактериологическом исследовании смывов микробное число (общее количество микроорганизмов на единице поверхности предмета) определяют методом Коха и выражают его на единицу поверхности предмета (обычно на 1 см²). То есть, подсчитывают количество выросших колоний, умножают на разведение и переводят результат на 1 см² площади исследуемой поверхности. Полученные результаты заносят в протокол бактериологического исследования (таблица 5) и делают общее заключение.

Санитарное состояние поверхности считается отличным, если общее количество микроорганизмов на 1 см² составляет от 0 до 100, хорошим – от 100 до 1000, удовлетворительным – более 1000, плохим – более 10000.

Таблица 5 – Протокол бактериологического исследования

Дата	Исследуемый объект	Площадь, см²	Количество микроорганизмов на 1 см²	Заключение о санитарном состоянии

5.3.2 Микрофлора воздуха

Простым методом исследования микрофлоры воздуха является качественный метод оседания микробов на поверхность агара в чашках Петри. Этот метод не дает полного количественного представления о микрофлоре воздуха. Он почти не улавливает тонкодисперсные бактериальные и пылевые фракции. Однако пользуясь этим методом, можно контролировать чистоту воздуха помещений. В зависимости от предполагаемой загрязненности воздуха микробами чашки со средой экспонируют от 5 до 20 мин. Чем чище воздух, тем продолжительнее экспозиция. Если поставлена цель уловить определенную группу микробов, используют элективную агаровую среду и экспозицию увеличивают на 30 минут.

Чтобы обнаружить микробы, содержащиеся в воздухе данного помещения, производят посев на стерильную чашку Петри со стерильным застывшим МПА. Для этого чашку Петри открывают и ставят в исследуемом помещении в таком месте, в котором нет движения воздуха. Чашку оставляют открытой определенное время, затем закрывают, переворачивают вверх дном и ставят в термостат на 48 ч.

На площади в 100 см² за 5 мин осаждается примерно столько клеток, сколько их находится в 10 л воздуха (0,01 м³). Для расчета микробного числа воздуха используют следующую формулу:

X =

где Х – количество микробов в 1 м³ воздуха;

а – количество колоний в чашке;

в – площадь чашки (πr²), см²;

t – время экспозиции, мин;

5 – время экспозиции, мин;

10 – объем воздуха, из которого происходит оседание микробов за 5 мин, л;

100 – площадь, на которую происходит оседание, см²;

1000 – объем воздуха, л.

Если в среднем на одной чашке с питательным агаром содержание микробов в 1 м³ менее 1500, то воздух считается чистым, если более 2500 – загрязненным.