5.2.1 Метод Коха

Расплавляют в кипящей водяной бане 20 мл ранее приготовленной стерильной глюкозо-пептонной среды (глюкоза – 40,0 г; пептон – 10,0 г; агар – 35,0 г; вода водопроводная 1000 мл). Среду стерилизуют при давлении 1,5 атм от 20 до 30 мин и разливают ее в три стерильные чашки Петри около пламени горелки. Когда среда застынет, делают высев из полученной от преподавателя культуры дрожжей Saccharomyces cerevisiae для определения числа живых клеток. С этой целью готовят разведения исходной культуры согласно п. 2.1.1. Производят посев только разведений 1:1000, 1:10000, 1:100000 путем нанесения каждый раз новой стерильной пипеткой по 0,1 мл суспензии (предварительно тщательно размешанной) на поверхность среды в чашках Петри. Посевной материал тщательно распределяют по поверхности агаризованной среды стерильными шпателями.

Чашки Петри, засеянные дрожжами, помещают в термостат при температуре 30 ºС на время от 3 до 5 суток. Чашки Петри инкубируют в термостате крышками вниз.

На следующем занятии подсчитывают число колоний S. сerevisiae в чашках Петри, и делают пересчет для определения общего числа живых клеток в 1 мл суспензии по формуле в п. 2.1.3.

Результаты работы оформляют в виде таблицы 3.

Таблица 3 – Количественный учет дрожжей по методу Коха

Разведение	Количество колоний, выросших на чашке Петри		Среднее число колоний а	Количество микроорганизмов в 1 мл исследуемой суспензии М
	повторность
	n	n
103
104
105

5.2.2 Подсчет клеток в камере Горяева

Используя все разведения, полученные в предыдущем опыте, подсчитывают число клеток дрожжей, пользуясь счетной камерой Горяева. Клетки подсчитывают в пяти больших квадратах, пользуясь объективом с увеличением 40. Количество клеток в 1 мл соответствующей суспензии рассчитывают по формуле из п. 1.2.1. Полученные результаты заносят в таблицу 4.

5.2.3 Нефелометрический метод

Плотность клеток S. сerevisiae в жидкой среде определяют нефелометрически (ФЭК), используя кювету с длиной оптического пути 0,5 см и зеленый светофильтр (λ=540 нм). Результаты измерений оптической плотности каждой суспензии (контролем служит вода) записывают в таблицу 4. На основании данных таблицы 4 строят калибровочную кривую, откладывая на оси абсцисс количество клеток дрожжей, а на оси ординат оптическую плотность соответствующей суспензии. Калибровочную кривую строят для быстрого определения количества клеток определенного вида микроорганизмов по показаниям ФЭК.

Таблица 4 – Количество клеток дрожжей в суспензиях, установленное с помощью камеры Горяева, и соответствующие показания ФЭК

Разведе-ние	Количество клеток микроорганизмов в большом квадрате счетной камеры					Среднее число клеток в малом квадрате а	Количество клеток М, млн/мл	Показа-ния ФЭК
	1	2	3	4	5