Микроскопическое исследование

Под обычным световым, фазово-контрастным или аноптрального микроскопом изучают нативные (неокрашенные) препараты или мазки. Плотный патологический материал (кожные чешуйки, соскобы с ногтей, некротизированные ткани и т.д.) вносят в каплю 10% раствора гидроксида калия или натрия на предметном стекле, осторожно подогревают над пламенем газовой горелки в течение 1 мин и накрывают покровным стеклом. Материал жидкой консистенции исследуют в смеси спирта с глицерином и водой в соотношении 2:1:2, или в растворе Люголя двойной концентрации в препаратах надавленные капли без подогрева. Микроскопия проводят сначала с помощью объектива 8х, а затем 40х. При наличии в исследуемом материале кандид в нативных препаратах обнаруживают круглые или овальные дрожжевые клетки, почкующихся, и псевдомицелий. Грибы кандиды встречаются на коже, слизистых оболочках и у здоровых людей, но, как правило, в небольшом количестве. Поэтому для более достоверной диагностики кандидоза важное количественное определение кандид в исследуемом материале. Обнаружение большого их количества в патологических выделениях (особенно при значительных разведениях) указывает на возможность кандидоза. Лучшие результаты дает исследование окрашенных препаратов. Высушенный тонкий мазок на предметном стекле фиксируют метиловым спиртом или в смеси Никифорова и окрашивают метиленовым синим (1-3 мин), генциановый фиолетовым (2-3 мин), фуксином Пфейфера (1-2 мин). Еще лучше красить мазки сложными методами. При окраске по Граму кандиды имеют темно-фиолетовый цвет, за Ципем- Нильсеном - синий с розово-желтоватыми включениями липидов, по Романовскому-Гимзе - розово-желтый с фиолетовыми включениями волютина. Кандиды можно обнаружить и при гистологическом исследовании срезов из пораженных тканей, окрашенных по методу Грама-Вейгерта или Шабадаша. При ранних сроках поражения можно применить прямой метод флуоресценции при обработке мазков изотиоцианатом флуоресцеина, который дает яркое золотисто-зеленое свечение. Более надежно диагноз кандидоза устанавливают посредством выделения чистой культуры С. albicans.

Микологическое исследования

Любой патологический материал сеют количественным методом на плотную среду Сабуро или сусло-агар, а также в глюкозный МПБ. В стерильных сред перед посевом добавляют пенициллин и стрептомицин для подавления роста сопутствующей бактериальной флоры. Посевы выращивают при температуре ЗО ° С. При росте более 1000 типичных колоний в расчете на 1 г исследуемого материала делают вывод, что кандиды является этиологическим агентом заболевания. Изолированные колонии С. albicans на агаре Сабуро круглые беловато-кремовые, блестящие, гладкие, с ровными краями, напоминающие капли майонеза. Они глубоко врастают в среду. Для выявления псевдомицелия колонии отсеивают в один из жидких сред - глюкозный МПБ, картофельную воду или морковно-рисовый отвар. Сначала появляется муть или осадок, реже - пленка на поверхности среды. Псевдомицелий обнаруживают на 3-5 день или позже при микроскопическом исследовании надавленные капли, пользуясь объективом 8х. Дифференциально-диагностические признаки С. albicans имеют важное значение для идентификации, поскольку этот вид является основным возбудителем кандидоза. На терминальных нитях псевдомицелия С. albicans образуются хламидоспоры - двухконтурные круглые структуры диаметром 10-20 мкм, бластоспоры появляются в результате почкования, располагаются нерегулярно с обеих сторон псевдомицелия. При культивировании в сыворотке или яичном белке при 37 ° С через 2-4 ч бластоспоры образуют характерные «ростовые трубки" или RB - фактор. Те штаммы, которые за столь короткий срок не приобретают "ростовых трубок", как правило, не вирулентные. Для идентификации видов грибов рода Candida используют также их ферментативную активность. С. albicans разлагает глюкозу, мальтозу и галактозу до кислоты и газа, С. tropicales-разлагает те же углеводы и дополнительную сахарозу, а С. fcrusei-только лактозу.