Лабораторная работа №14. Разделение смеси красителей методом тонкослойной хроматографии

Цель работы: освоить технику работы при постановке ТСХ; провести разделение методом ТСХ смеси красителей, содержащей до трех компонентов из указанных ниже: судан II, судан IV, малахитовый зеленый, судан I, -нафтоловый оранжевый, эозин-натрий, родамин Ж, 2,4-динитрофенол, метиловый красный, бромтимоловый синий, метиловый голубой, флуоресцеин.

Оборудование: капилляры, пластины марки «Sorbfil» или «Силуфол» с УФ-индикатором ПТСХ-АФ-В-УФ или ПТСХ-П-В-УФ или без УФ-индикатора, хроматографическая камера, сушильный шкаф либо промышленный сушильный пистолет. Подвижная фаза: смесь вода – пропан-2-ол – 25% водный раствор аммиака (1 : 8 : 1).

Выполнение работы. Наряду с различными консервирующими веществами в пищевые продукты с целью придания им товарного вида добавляют красители. Они широко встречаются в составе как промышленных, так и продовольственных товаров. В связи с этим в настоящее время поставлены вопросы о физиологической роли и значении добавляемых в продукты пищевых красителей, о возможности накопления их в организме, токсичности, канцерогенности и т.д. В связи с этим идентификация пищевых красителей в различных объектах является актуальной задачей в современном промышленном и продовольственном производстве.

Методы определения пищевых красителей из продуктов сводятся, как правило, к их экстракции с последующим определением при помощи различных аналитических методов, в том числе и с помощью ТСХ.

Подготовка хроматографической пластины. На пластине размером 10×10 см или менее на расстоянии 0,51 см от края карандашом проводят стартовую линию. На таком же расстоянии от левого края отмечают первую точку для нанесения пробы, расстояние между пробами на хроматограмме должно составлять около 1 см.

Приготовление элюирующей системы. С помощью мерных пипеток готовят 30-50 мл элюирующей системы растворителей: вода – пропан-2-ол – 25% водный раствор аммиака (1 : 8 : 1).

Хроматографирование. Пластинку для ТСХ следует брать аккуратно за края, не захватывая при этом её центральную часть!

Нанесение образца на пластинку для ТСХ. На расстоянии 1 см от нижнего края пластинки нанесите данную для исследования смесь и семь возможных ее компонентов. При этом раствор следует наносить так, чтобы капля не расплывалась (чем меньше диаметр капли, тем более четкой будет хроматограмма). Диаметр пятна не должен превышать 2-3 мм, а расстояние между пятнами должно быть не менее 7 мм. Пятно можно обвести карандашом (ни в коем случае в этих целях нельзя использовать гелевую или шариковую ручку!).

Получение хроматограммы. После полного высушивания пластинку помещают в специальную камеру с плоским дном для восходящего элюирования, в котором залита элюирующая система. Нижний край хроматограммы опускают в растворитель на 2-3 мм. Пятно не должно погружаться в растворитель, а пластинка не должна касаться стенок цилиндра. Элюирование прекращают в момент, когда линия фронта не доходит до края пластины около 7 мм. Время хроматографирования составляет несколько минут. После этого пластинку вынимают, отмечают на ней положение фронта растворителя и тщательно высушивают в токе сухого воздуха. Измеряют расстояние между стартовой линией и фронтом растворителя L. Затем по экспериментально найденной величине L вычисляют l  высоту подъема зоны каждого красителя из заданной комбинации. Вычисляют величины N_A, H_A, Rs и α для двух красителей разделяемой смеси (рис. 2.1) по формулам 2.3, 2.4, 2.5 и 2.6 соответственно. Делают вывод о качественном составе анализируемой смеси и селективности разделения.

Таблица 2.5.

Селективность разделения методом ТСХ смеси красителей

Номер пробы	Значение коэффициента подвижности		Параметры эффективности хроматографического разделения					Название соединения
	Rf стандарта	Rf компонентасмеси	l, мм	а, мм	N	H, мм	α
1.
…
9.
Rs = l / (a(A) / 2 + a(B) / 2) = 2l / (a(A) + a(B))

Идентификация. Зарисовывается расположение пятен на хроматограмме. Качественный состав смеси красителей в анализируемом растворе устанавливают, сопоставляя положение на хроматограмме окрашенных пятен стандартных образцов и анализируемой смеси. Для большей точности определения рассчитывают коэффициент подвижности R_f для стандартных образцов и компонентов анализируемой смеси в данной элюирующей системе. Результаты заносят в таблицу. Сопоставляя значения R_f соединений, делают вывод о наличии тех или иных компонентов в пробе. Результаты заносят в таблицу 2.5.