4. Определение аминокислот формолтитрованием по Сьоренсону

Принцип метода. Метод основан на способности аминокислот реагировать с нейтральным раствором формальдегида с образованием метиленаминокислот. Этот метод применяется для определения карбоксильных групп аминокислот, которые титруют раствором щелочи, предварительно блокировав аминогруппы формальдегидом. Во время реакции с формальдегидом аминогруппа теряет основные свойства, при этом образуется метиленаминокислота, которая оттитровывается щелочью

Определяя количество карбоксильных групп титрованием, можно одновременно определить и количество ос-аминогрупп, так как количество карбоксильных групп эквивалентно количеству связанных с формальдегидом ос-аминогрупп.

Материалы и реактивы. Складчатый бумажный фильтр, сухой хлористый барий, 1 %-ная смесь аминокислот (вытяжка аминокислот из биологического материала или биологическая жидкость – моча), 0,1 %-ньй спиртовый раствор фенолфталеина, 0,01 моль/л раствор соляной кислоты, 0,05 моль/л раствор гидроксида калия, формольная смесь (к 50 мл 40 %-ного раствора формальдегида добавляют 10 капель 0,1 %-ного раствора фенолфталеина и по каплям 0,1 моль/л раствор гидроксида калия до образования слабой розовой окраски).

Оборудование. Колбы мерные (объем 100 мл), капельницы, воронка стеклянная, бюретка, часы.

Ход работы. К 25 мл смеси аминокислот в колбе прибавляют 1 г хлористого бария, 10 капель раствора фенолфталеина и перемешивают. К смеси приливают насыщенный раствор баритовой воды до появления едва заметного розового окрашивания. Колбу закрывают и оставляют на 15 мин. Затем разбавляют водой до объема 100 мл и отфильтровывают через складчатый бумажный фильтр от фосфорнокислых и углекислых солей бария. Готовят две колбы объемом 100 мл. В одну вносят 40 мл фильтрата, что соответствует 10 мл раствора аминокислот, во вторую – 40 мл дистиллированной воды. Прибавляют по 10 капель раствора фенолфталеина и раствор соляной кислоты (осторожно) до окрашивания растворов (контроля и пробы) в едва заметный розовый цвет. Затем в обе колбы вносят по 10 мл формольной смеси и титруют из бюретки раствором гидроксида калия до появления едва заметной розовой окраски. Цвет контроля и пробы должен быть одинаковым.

Массовую концентрацию аминокислот (мг/мл) рассчитывают но формуле

С = (А-В) fQ/V,

где А и В – объемы раствора гидроксида калия, затраченные на титрование пробы и контроля соответственно (мл); f – коэффициент поправки на титр 0,05 моль/л раствора гидроксида калия; Q – масса аминокислот, эквивалентная 1 мл 0,05 моль/л раствора гидроксида калия (0,7 мг); V – объем раствора аминокислоты, взятого для анализа.