81. Реакция нейтрализации токсинов и вирусов: сущность, способы постановки и учета, диагностическое значение.

РН – это реакция, осонованная на способности АТ нейтролизовать ядовитые свойства токсинов и вирусов.

Способ постановки:

1. Постановка РН на лабораторных животных при токсигенных инфекциях

2. Постановка РН на культуре клеток, куриных эмбрионах при вирусных инфекциях

3. Постановка РН для титрования анатоксина и антитоксической сыворотки

Постановка РН in vivo на лабораторных животных. Готовят взвеси сывороток и АГ, которые вводят лабораторным животным. Критерием служит гибель животного в контроле, зараженного этим вирусом.

Постановка РН на культурах клеток и куриных эмбрионах. Идентификацию вируса проводят по цитоплазматическим изменениям на культуре клеток,а на куриныхэмбрионахвыявляют морфологические изменения на хорион-аллантоистных оболочках

Реакция флокуляции. Экзотоксины продуцируют многие виды микробов. Лечение и профилактика таких инфекций осуществляется с помощью анатоксических сывороток и анатоксинов. РН используют для титрования анатоксина и антитоксической сыворотки.

82. Иммунолюминесцентный метод: сущность, направления, способы постановки и учета, диагностическое значение.

Иммунофлюоресцентный анализ. Это реакция, в которой используют меченные флюорохромными красителями иммунные сыворотки. Их получают имммуннизацией животных соответствующими АГ, затем химически соединяют со светящимися красителями.

Способ постановки:

1.прямой метод

2.непрямой метод, метод Куиса

При прямом методе из исследуемого материала готовят препарат – мазок, обработанный флюоресцирующей сывороткой, содержащие АТ с искомому АГ. Мазок изучают в люминесцетном микроскопе.

При положительной реакции наблюдается свечение флюоресцирующего красителя, как результат взаимодействия АГ+АТ

Непрямой метод. Мазок с известной культурой обрабатывабт сывороткой больного, а затем антиглобулиновой сывороткой, меченной флюорохромом.

При положительной реакции наблюдается свечение. ИЛ метод позволяет быстро выявить, как бактериальную инфекцию больного, так и выявить АТ в сыворотке крови больного. Используют для выявления хламидийной инфекции.

83. Иммуноферментный и радиоиммунный анализ: сущность, условия, направления, способы постановки и учета, диагностическое значение.

Иммуноферментный анализ. Этот метод для выявления,как АГ с помощью соответсвующих им АТ, конъюгированных с ферментом, так и АТ сыворотки крови больного.

Способ постановки:

Реакцию ставят в лунках полистероловых пластин. Разведение сыворотки проводят микропипетками.

При выявлении АГ к нему добавляют соответствующие АТ, конъюгированы ферментом-меткой. После соединения АГ с меченной ферментом иммунной сыворотки в смесь добавляют субстрат-хромоген. Субстрат расщепляется ферментом и изменяет цвет реакции. Результат учитывают спектрофотометрически.

Применяют для бактериальных, паразитарных и вирусных болезней(ВИЧ, гепатит В…)

Радиоиммунный анализ. Радиоиммунный анализ (РИА) является чрезвычайно чувствительным методом, который мо­жет быть использован для количественного определения лю­бого антигена. Чувствительность метода позволяет выявлять незначительные количества антигена.

Для проведения жидкостного радиоиммунного анализа очи­щенный известный антиген метят радионуклидами, чаще всего ¹²⁵1. В этом случае используют конкурентный вариант связы­вания, когда для определения количества антигена в исследу­емом образце оценивают его способность конкурировать с меченым референс-антигеном в связывании со специфическими антителами. Образующиеся комплексы антиген—антитело выде­ляют осаждением (сульфатом аммония или антиантителами) и определяют их радиоактивность в сопоставлении с радиоактив­ностью несвязанного антигена в надосадочной жидкости. Ис­пользование ряда концентраций немеченого антигена позволяет построить стандартную калибровочную кривую, с помощью которой определяется концентрация исследуемого антигена.

Более современный метод — твердофазный РИА, при кото­ром специфические антитела фиксируются на твердой фазе, к ним добавляется исследуемый антиген, а затем меченый стан­дартный антиген. Определение связанной и несвязанной метки позволяет построить калибровочную кривую и определить ко­личество исследуемого антигена.

РИА широко применяют для количественного определения

различных веществ: гормонов (инсулина, гормона роста, адренокортикотропного гормона, трийодтиронина, тироксина, эст­рогена), белков сыворотки крови (IgE, а-фетопротеина и др.), метаболитов (фолиевой кислоты, циклических нуклеотидов и др.), лекарственных препаратов (дигоксина, дигитоксина, мор­фина), микробных антигенов (HBsAg).