75. Диагностические направления в постановке серологических реакций: сероидентификация, сероиндикация, серодиагностика. Серологические реакции

Реакции между антигенами и антителами in vitro или серологические реакции широко используются в микробиологических и серологических (иммунологических) лабораториях с самыми разнообразными целями:

• серодиагностики бактериальных, вирусных, реже других инфекционных заболеваний,

• сероидентификации выделенных бактериальных, вирусных и других культур различных микроорганизмов

Серодиагностику проводят с помощью набора специфических антигенов, выпускаемых коммерческими фирмами. По результатам серодиагностических реакций судят о динамике накопления антител в процессе заболевания, о напряженности постинфекционного либо поствакцинального иммунитета.

Сероидентификацию микробных культур проводят для определения их вида, серовара с помощью наборов специфических антисывороток, также выпускаемых коммерческими фирмами.

Каждая серологическая реакция характеризуется специфичностью и чувствительностью. Под специфичностью понимают способность антигенов или антител реагировать только с гомологичными антителами, содержащимися в сыворотке крови, либо с гомологичными антигенами соответственно. Чем выше специфичность, тем меньше ложноположительных и ложноотрицательных результатов.

В серологических реакциях участвуют антитела, принадлежащие главным образом к иммуноглобулинам классов IgG и IgM.

Сероиндикация – качестве АГ используется не чистая культура микроба, а исследуемый материал от больного, в котором и определяют АГ.

76. Реакция преципитации: сущность, условия и способы постановки и учета, диагностическое значение. Использование при определении уровня иммуноглобулинов в крови.

Реакция преципитации относится к ускоренным серологическим реакциям, отличается высокой чувствительностью. АГ в этой реакции является токсин, гаптен.

Способ получение гаптена: суточную агаровую культуру бактерий смывают изотоническим раствором натри хлорида, кипятят, фильтруют, титруют. Титром преципитирующей сыворотки считают наименьшее количество АГ,которое видимую реакцию.

Способ постановки:

1.реакция кольцеприципитации. На приципитирубщую сыворотку наслаивают гаптен. При положительной реакции на границе двух сред появляется мутное кольцо.

2. реакция преципитации в геле. Ингредиенты реакции (АГ+АТ) помещают в отдельные лунки в прозрачном слое агара. При положительной реакции в местах встрчеи диффундирующих в среду АГ и АТ образуются белые линии преципитата.

С помощью преципитации определяют видовую принадлежность белковых и кровяных пятен.

Варианты реакции в геле:

А. радиальная иммуннодиффузия в геле по Мачини. Для определения уровня иммуноглобулинов в сыворотке крови больного. Для постановки необходимы наборы моноспецифических диагностических сывороток против иммуноглобулинов человека. Их получают гипериммунизацией кроликов, офец или коз иммуноглобулинами.

Способ постановки. На стеклянную пластинку, покрытую тонким слоем агара, с лунками вносят сыворотку больного и диагностические монорецепторные сыворотки. Пластинки выдерживают во влжной камере при температуре 24 , 48 часов. Учет результатов производят по измерению диметра колец преципитации.

Б. иммуноэлектрофорез. Метод иммуноболтинга. Аг наносится на нитроцеллюлозную мембрыну, добавляют Ат сыворотки больного. В случае положительной реакции АГ+АТ образуются полоски преципитата. Эту реакции. Используют для выявления у больного с ВИЧ-инфекцией различных антиВИЧ-антител к разным белкам вируса.