27. Механизмы развития лекарственной устойчивости у микробов. Методы определения чувствительности микробов к химиопрепаратам в лабораторной практике.

Механизмы резистентности бактерий к антибиотикам:

1.Первичные – отсутствие «мишени» для воздействия

2.Приобретённые путём

• переноса генов хромосомы, контролирующих синтез

• мутаций в генах, контролирующих синтез – компонентов клеточной стенки – ЦПМ – рибосомных белков – транспортных белков

• переноса генов R-плазмиды, контролирующих синтез ферментов, инактивирующих или модифицирующих антибиотики, нарушающих функции транспортных белков

Методы определения чувствительности к антибиотикам:

1.Метод дисков. Исследуемую культуру засевают сплошным газоном на питательный агар в чашки Петри. Затем на его поверхность помещают на равномерном расстоянии друг от друга бумажные диски, содержащие определённые дозы разных антибиотиков. По диаметру зон задержки роста культуры судят о её чувствительности (диаметр до 10 мм – малочувствительная, свыше 10 мм – высокочувствительная).

2.Метод серийных разведений. Готовят раствор, содержащий определённую концентрацию антибиотика. Из него готовят все последующие разведения в бульоне (в объёме 1 мл), после чего к каждому разведению добавляют 0,1 мл исследуемой бактериальной суспензии (10⁶– 10⁷ бактериальных клеток в 1 мл). В последнюю пробирку вносят 1 мл бульона и 0,1 мл суспензии (контроль). Результаты отмечают по помутнению питательной среды, сравнивая с контролем культуры. Определяется минимальная ингибирующая концентрация антибиотика.

28. Особенности структуры и функционирования генетического аппарата у эукариот, прокариот, днк- и рнк- содержащих вирусов.

В состав нуклеотида бактерий входят ДНК, РНК и белки. Число нуклеотидов в бактериальной клетке может варьировать от одного (в культурах, находящихся в стационарной фазе роста) до двух (в стадии задержки размножения после переноса клеток в свежую среду) и четырех (в культурах с постоянной скоростью роста). Каждый нуклеотид содержит двухцепочечную замкнутую в кольцо молекулу ДНК. В молекуле ДНК нуклеотида закодирована вся генетическая информация, необходимая для жизнедеятельности клетки, поэтому нуклеотид рассматривают как бактериальную хромосому. Хромосомы имеют кольцевое строение. Гигантская молекула ДНК бактериальной хромосомы поддерживается связанными с ней молекулами РНК и белка в форме компактной структуры, свернутой в отдельные сверхспирализованные петли (домены), число которых колеблется от 12 до 80.

Помимо хромосомной ДНК в состав генома многих прокариот входят также сверхскрученные, ковалентно-замкнутые   кольцевые   молекулы   внехромосомной,   или плазмидной, ДНК.

Способы передачи наследственной информации у бактерий:

1. трансформация – перенос изолированных фрагментов молекулы ДНК из одного организма к другому.

2. трансдукция это способность переносить наследственную информацию от одного организма к другому при помощи вирусов.

3. конъюгация – обмен наследственной информацией.

Вирусы, представляют собой частицы (вирионы), стоящие на грани между живой и неживой природой и обладающие инфекционными свойствами. В дословном переводе термин «вирус» обозначает яд, ядовитое вещество.

Генетический материал вируса представлен одной молекулой нуклеиновой кислоты, ДНК или РНК, не связанной с белком. В связи с этим вирусы подразделяются на ДНК- и РНК-содержащие. Вирусы бактерий чаще содержат ДНК, а почти все вирусы растений и подавляющее большинство вирусов человека – РНК.

Нуклеиновая кислота вируса бывает одно- или двухцепочечной и может иметь кольцевую или линейную форму. Кольцевая форма ДНК более стабильна и свойственна большинству вирусов. Кольцо ДНК (РНК) обычно бывает перекручено, поэтому она имеет суперспирализованный вид.

В нуклеиновой кислоте вируса закодирована информация о всех его структурных белках. Многие вирусы содержат гены специфических полимераз (репликаз) — ферментов, контролирующих репликацию молекул нуклеиновых кислот. Но чаще вирусы используют для репликации ферментов клетки-хозяина. Некоторые мелкие вирусы содержат только три гена. Гены вирусов могут существовать в виде фрагментов ДНК, разделенных генетически инертными нуклеотидными последовательностями. Эти последовательности в момент работы генов «вырезаются», и целостность генетической информации восстанавливается.

Генетическое вещество у вирусов заключено в белковую оболочку, которая вместе с нуклеиновой кислотой образует так называемый капсид или нуклеокапсид. Большинство вирусов растений и РНК-содержащих бактериальных фагов состоит только из нуклеиновой кислоты и белка.