Лекции 16, 17
Методы генной инженерии
Взаимосвязь генной инженерии и биохимии и основные этапы ее развития. Методы генной инженерии. Эндонуклеазы рестрикции. Клонирование ДНК. Полимеразная цепная реакция и амплификация фрагментов ДНК. Анализ длины рестрикционных фрагментов. Секвенирование ДНК
1. Взаимосвязь генной инженерии и биохимии и основные этапы ее развития. Развитие генной инженерии начавшееся с 70-х годов прошлого века в значительной степени основано на разработке и совершенствовании биохимических методов анализа и манипулирования ДНК. Генная инженерия не является наукой в широком смысле, но является инструментом биотехнологии, которая использует методы таких наук, как биохимия, молекулярная биология, генетика и микробиология. Биотехнология как отдельная дисциплина выросла из биохимии в середине прошлого века. Биотехнология это совокупность методов получения различных продуктов: пищевых продуктов, лекарственных средств, витаминов и др. с использованием микроорганизмов. По мере развития биохимических и микробиологических методов исследования микроорганизмов сформировалась молекулярная биология в середине 60-х годов прошлого века и затем на базе молекулярной биологии возникла генная инженерия Генная инженерия - совокупность приёмов, методов и технологий получения рекомбинантных РНК и ДНК, выделения генов из организма (клеток), осуществления манипуляций с генами и введения их в другие организмы. |
В отличие от традиционной селекции, в ходе которой генотип подвергается изменениям лишь косвенно, генная инженерия позволяет непосредственно вмешиваться в генетический аппарат, применяя технику молекулярного клонирования. Примерами применения генной инженерии являются получение новых генетически модифицированных сортов зерновых и овощных культур, производство человеческого инсулина путём использования генномодифицированных бактерий, производство витамина В12 путем выращивания бактерий на парафинах (процесс «Пайрекс»), производство кортизона, где стадия окисления в положение 11 стероидного цикла осуществляется микробиологическим путем, утилизация и очистка сточных вод, выведение новых пород экспериментальных мышей для научных исследований.
Во второй половине XX века было сделано несколько важных открытий и изобретений, лежащих в основе генной инженерии. Успешно завершились многолетние попытки «прочитать» ту биологическую информацию, которая «записана» в генах. Эта работа была начатабиохимиками учёным Ф. Сенгером* и американским учёным У. Гилбертом**. Как теперь известно, в генах содержится информация для синтеза в организме молекул РНК и белков, в том числе ферментов.
—
* Фредерик Сенгер – английский биохимик. Основные работы посвящены химии белка. Разработал
методы получения инсулина и др. гормонов. Предложил метод секвенирования
ДНК. Нобелевские премии 1958 и 1980 годов.
* Уолтер Гилберт – американский биохимик. Основные работы посвящены молекулярной биологии.
Предложил метод секвенирования стуктуры ДНК. Установил первичную структуру
ряда ДНК. Нобелевская премия 1980 г совместно с Ф.Сенгером.
Чтобы заставить клетку синтезировать новые, необычные для неё вещества, надо чтобы в ней синтезировались соответствующие наборы ферментов.
А для этого необходимо или целенаправленно изменить находящиеся в ней гены, или ввести в неё новые, ранее отсутствовавшие гены. Изменения генов в живых клетках - это мутации. Они происходят под действием, например, мутагенов - химических ядов или излучений. Но такие изменения нельзя контролировать или направлять. Поэтому учёные сосредоточили усилия на попытках разработать методы введения в клетку новых, совершенно определённых генов, нужных человеку.
Генная инженерия человека
В применении к человеку генная инженерия могла бы применяться для лечения наследственных болезней. Однако, технически, есть существенная разница между лечением самого пациента и изменением генома его потомков.
Задача изменения генома взрослого человека несколько сложнее, чем выведение новых генноинженерных пород животных, поскольку в данном случае требуется изменить геном многочисленных клеток уже сформировавшегося организма, а не одной лишь яйцеклетки-зародыша. Для этого предлагается использовать вирусные частицы в качестве вектора. Вирусные частицы способны проникать в значительный процент клеток взрослого человека, встраивая в них свою наследственную информацию; возможно контролируемое размножение вирусных частиц в организме.
С помощью генотерапии в будущем возможно изменение генома человека. В настоящее время эффективные методы изменения генома человека находятся на стадии разработки и испытаний на приматах. Долгое время генетическая инженерия обезьян сталкивалась с серьёзными трудностями, однако в 2009 году эксперименты увенчались успехом: в журнале Nature появилась публикация об успешном применении генноинженерных вирусных векторов для исцеления взрослого самца обезьяны от дальтонизма. В этом же году дал потомство первый генетически модифицированный примат, выращенный из модифицированной яйцеклетки.
Хотя и в небольшом масштабе, генная инженерия уже используется для того, чтобы дать шанс забеременеть женщинам с некоторыми разновидностями бесплодия. Для этого используют яйцеклетки здоровой женщины. Ребёнок в результате наследует генотип от одного отца и двух матерей.