Фаза блеббинга.

После округления клеток, которое происходит в процессе фазы высвобождения, наступает фаза блеббинга. В этой фазе на мембране как бы вздуваются многочисленные пузыри, клетка как бы кипит. В это время происходит центростремительное сокращение кортикального актинового кольца за счет активации миозина II . В то же время мембранно-актиновые связи фокально ослабляются, приводя к выталкиванию блебов в зонах, где это ослабление происходит. Обратно направленное усилие, (возможно связанное с миозином I или миозином IV) ретрактирует блебы, и цикл повторяется. Актин и миозин могут концентрироваться в основании блебов, и тонкий слой мембрано-ассоциированых актинов окружает блебы.

Блеббинг не происходит в некоторых клетках, где нет каспазы 3. Похоже, что в них первая фаза (высвобождение) происходит, но они не блеббируют, что заставляет думать, что существует некоторый клеточный механизм проверки хода процесса между стадиями высвобождения и блеббинга.

Миозин II или обычный миозин повидимому обеспечивает силу для динамического мембранного блеббинга как в апоптических так и в неапоптических системах. Ингибирование миозиновой моторной активности или миозиновых активаторов MLCK или RhoA прекращает формирование блебов в апоптических клетках. Понимание роли необычных миозинов основывается на том факте, что общий миозиновый моторный ингибитор (бутадион топоксин BDM) ингибирует ретракцию блебов и на понимании того, какую роль необычные миозино-подобные миозин I и миозин IV играют в регулировке мембранных структур вообще.

Разрушение актинового цитоскелета действием цитохалазина D уменьшает мембранный блеббинг, свидетельствуя, что полимеризация актина и/или полимеризованный актин необходимы для генерации силы.

Связи, которые эти актин-связывающие белки обеспечивают между актиновым цитоскелетом и плазматической мембраной могут фокально нарушаться, позволяя блебам проникать в места, где мембрана не укреплена цитоскелетом. Фордин (неэритроцитный спектрин) был зарегистрирован в блеббинге много раз, так как он легко расщепляется во многих местах каспазами и калпанами. Эзрин, моезин, радиксин - семейство актин-мембрано-связывающих протеинов также дефосфолирируется и диссоциирует из мембраны во время фазы экзекуции. Эзрин может быть связан каспазами.

Эффекторы. Хотя каспазы связывают цитоскелетные компоненты подобные фодрину и следовательно включены в процессы на этой стадии, многие клетки блеббируют днями, в то время как каспазы в них, по-видимому, ингибированы. Активаторы миозина MLCK, который активирует немышечный миозин II путем фосфорилирования регуляторной короткой цепи, необходимы для инициации и развития блеббинга. Было показано, что RhoA тоже важен для блеббинга, возможно, за счет активизации Rho киназы, которая фосфорилирует и ингибирует фосфатазу миозина.

Для блеббинга необходимо большое количество ATP (для поддержания сократимости миозина) так что генерация энергии в клетках не затрагивается.

Фаза конденсации.

Все клетки в конце концов заканчивают блеббинг. При нормальных условиях это обычно происходит с удивительной регулярностью примерно через час. Прекращение блеббинга сопровождается фрагментацией клетки в маленькие апоптические частицы (тела) или конденсацией в маленькую сферу, причем актин и микротрубочки в значительной степени разобраны или деградированы.

Стадия конденсации может просто представлять собой конечный результат блеббинга, когда сокращение оказывается достаточно сильным чтобы сжать апоптические тела. Однако ингибиция каспаз может остановить процесс формирования апоптического тела без прекращения блеббинга. Следовательно, формирование апоптического тела, хотя и является прямым продолжением блеббинга, должно представлять собой отдельную стадию фазы экзекуции, немедленно следующую за блеббингом. Может существовать некий внутренний механизм контроля хода процесса между блеббингом и конденсацией или может быть клетка может конденсироваться только после того как цитоскелет был разобран/реорганизован, что позволит перейти к растворению цитоплазмы.

Очень немногое известно относительно спецификации регуляторных аспектов этой финальной стадии апоптоза; однако F-актин, по-видимому, необходим для формирования апоптического тела.

Каспазы наверное играют важную роль, поскольку ингибирование каспаз ведет или к морфологическим изменениям в ходе апоптоза или к задержке клеток в стадии блеббинга, когда они не способны к конденсации. Возможно, роль каспаз в процессе сокращения клеток состоит, в ограничении блеббинга и индукции конденсации. Это может случиться, если каспазы приводят к медленной деградации белков, нужных для блеббинга (например, актина). Другие протеазы могут также быть важными (например, сериновые протеазы и протеасомальные протеазы).

Pak1 киназа, активированная р21 (PAC-p21-activated kinase), по-видимому, важна для формирования апоптозного тела. В некоторых клетках активация протеин кросс-связывающего энзима, трансглютаминазы, была зафиксирована в процессе цитоплазматической упаковки в фазе конденсации.