- •Занятие № 11. Цитоскелет.
- •1. Промежуточные филаменты (пф).
- •1.1. Особенности строения эпителиальных кератинов.
- •1.2. Функции эпителиальных промежуточных филаментов.
- •1.3. Формирование промежуточных филаментов. Образование цитоплазматической сети.
- •1.4. Динамика и регуляция работы кератинов. Связь с клеточным циклом.
- •1.5. Кератиновые болезни.
- •1.6. Особенности строения и функций кератинов 8 и 18.
- •1.7. Кератины 8/18, апоптоз, клеточный цикл, протоонкогены.
- •2. Микрофиламенты.
- •2.1. Актин.
- •2.2. Актин-связывающие белки.
- •Г лобулярные белки.
- •П алочковидные белки.
- •Нитевидные белки.
- •Другие сшивающие белки.
- •2.3. Миозин.
- •2.3.1. Миозин II.
- •2.3.2. Миозин I.
- •2.3.3. Регуляция актомиозинового взаимодействия.
- •3. Микротрубочки (мт).
- •3.1. Полимеризация тубулина. Динамическая нестабильность.
- •3 .2. Белки, ассоциированные с мт.
- •3.3. Белки-транслокаторы.
- •3.3.1. Кинезиноподобные белки.
- •3.3.2. Динеиноподобные белки.
- •3.4. Антимитотические агенты.
- •4. Процесс распластывания.
- •4.1. Стадии распластывания.
- •4.2. Распластывание. Мт и пф.
- •5. Клеточный центр.
- •5.1. Структура и функции центриолей и центросомы.
- •5.2. Биохимические особенности центриоли и центросомы.
- •5.3. Нарушения в строении и функционировании центросомы. Роль центросомы в формировании злокачественных опухолей.
- •6. Препараты и эмф.
- •6.1. Цитоскелет.
- •Цитоскелет в первичных фибробластах. Препарат.
- •Цитоскелет в фибробласте. Эмф.
6. Препараты и эмф.
6.1. Цитоскелет.
Цитоскелет в первичных фибробластах. Препарат.
Окраска Кумасси бриллиантовым синим. Относится к группе проционовых красителей. Их молекулы состоят из активной части (дихлортиазинового кольца, специфически реагирующего с аминогруппами белков) и хромофобной части, обусловливающей цвет красителя. Белки пробы взаимодействуют с сульфогруппами красителей, образуя комплекс белок-краситель, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации белка в исследуемом растворе. Основной недостаток этой группы методов заключается в различной способности разных белков связывать краситель.
Для того, чтобы получить этот препарат, необходимо сначала убрать мембранные структуры. Для этого клетки обрабатывают хелатонами, например, тритоном. На препарате видны прямые нити по краям – это стресс-фибриллы.
На фотографии (световая фазово-контрастная микроскопия) представлен первичный мышиный фибробласт (живой).
Цитоскелет в фибробласте. Эмф.
Для создания этого препарата сначала также убирают мембранные структуры. Затем получают платиновую реплику (метод напыления). Далее препарат опускаем в плавиковую кислоту, которая растворяет стекло. Полученные тонкие (10-15Å) пленки напыления «ловятся» на бледны для электронной микроскопии.
Цитоскелет в фибробласте. Ведущий край клетки.
На фотографии видна область фокального контакта. Вследствие небольшого увеличения определить тип филаментов цитоскелета невозможно, но очень хорошо видно, что они образуют сеть.
Цитоскелет в фибробласте. Околоядерная зона.
На фотографии видны белки ламины, актиновые филаменты и α-актинин.
Цитоскелет в фибробласте. Участок цитоплазмы.
Хорошо прослеживаются все три компонента цитоскелета
Иммунофлуорисценция промежуточных филаментов.
Промежуточные филаменты. ЭМФ.
На ЭМФ представлены 2 типа промежуточных филаментов: белки ламины и филаменты, расположенные в цитоплазме.
Актиновые филаменты. Ведущий край клетки.ЭМФ.
Строение саркомера. ЭМФ,
Иммунофлуоресценция актиновых микрофиламентов в фибробласте кожи человека.
Иммунофлуоресценция тропомиозиновых микрофиламентов в фибробласте кожи человека.
Иммунофлуоресценция миозиновых микрофиламентов в фибробласте кожи человека.
Микротрубочки. Метод фазового контраста. Иммунофлуорисценция – α-тубулин.
Поляризованный движущийся фибробласт.
На фото: красным цветом окрашены микрофиламенты, связанные с антителами к актину; зеленым – микротрубочки, окрашенные антителами к α-тубулину
6.2. Центросома и центриоль.
Клетка культуры ткани в S-G2-периоде.
Иммунофлуорисцентное окрашивание антителами к γ-тубулину.
Схема строения центриоли.
На фото представлена дочерняя центриоль, характерным признаком которой является наличие «оси со спицами».
Центриоль опухолевой клетки.
Как уже говорилось выше, аномальное строение центриолей было выявлено во многих опухолевых клетках. На данной ЭМФ представлена центриоль, сочетающая в себе признаки дочерней и материнской центриоли: одновременное наличие придатков и «оси со спицами».