3.4. Антимитотические агенты.

Антимитотические агенты – вещества, которые способны блокировать клетки в митозе.

• Колхицин. Молекулы колхицина прочно связываются с молекулами тубулина (образуя эквимолярный комплекс) и препятствуют тем самым их поляризации. Обработка делящихся клеток колхицином вызывает через несколько минут исчезновение веретена деления и блокирует клетки в митозе.

• Колцемид. Производное колхицина. Также как и колхицин, прочно связывается с тубулином и препятствует его полимеризации.

• Нокодазол не является производным колхицина, но принцип его действия такой же.

• Таксол. Растительный алкалоид из тиса. Таксол прочно связывается с МТ и стабилизирует их. Таксол связывается по сайту, который расположен рядом с ГТФ-связывающим сайтом.

• Винбластин и винкристин. Относится к винкаалкалоидам. Эти вещества связываются с другим, чем колхицин, участком молекулы тубулина. Как и колхицин, винкаалкалоиды эффективны с субстехиометрических концентрациях. Отличительной особенностью винкаалкалоидов является их способность индуцировать образование тубулиновых паракристаллов в цитоплазме.

4. Процесс распластывания.

4.1. Стадии распластывания.

Морфология распластывания детально изучена на примере нормальных фибробластов (культура клеток). Эти исследования позволили выделить несколько стадий распластывания и поляризации.

На стадии начального прикрепления клетка соприкасается с подложкой нижней поверхностью, при этом выростов плазматической мембраны не обнаруживается. В районе контакта клетки с субстратом мембрана уплощена повторяет форму субстрата; в целом такие клетки мало отличаются от суспендированных. Затем мембрана образует пузыревидные выпячивания вытянутой формы, приподнятые над субстратом на 1-2 мкм. От нижней поверхности таких почек отходят 1-2 микроворсиники. Уже через несколько минут после контакта с субстратом клетка начинает образовывать псевдоподии, которые либо прикрепляются в к подложке, либо вновь втягиваются внутрь.

Принято выделять несколько разных типов псевдоподий:

― филоподии – цилиндрические псевдоподии диаметром 0,3,-0,52 мкм;

― ламеллоподии – уплощенные псевдоподии шириной 2-5 мкм;

― лобоподии - большие отростки диаметром 1-2 мкм;

― рафлы – большие складки на верхней поверхности.

Таким образом, через 0,5 часа после посадки фибробластов на субстрат они имеют небольшие размеры, выпуклый центр и отростчатую периферию.

Следующая стадия распластывания – радиальная – по разным данным занимает от нескольких минут до трех часов. На этой стадии центральная часть клетки уплощается, наружный край клетки по-прежнему активен. В начальной стадии распластывания наиболее частыми являются филоподии, прикрепленные к подложке своими концами, затем ламеллоподии, прикрепленные в нескольких точках, и рафлы. При этом преобладание различных типов псевдоподий зависит от специфичности используемой культуры клеток. Например, для фибробластов хомяка характерны ламеллоподиии, а для фибробластов мыши – филоподии.

Началом третьей стадии – стадии поляризации – принято считать появление выраженной неравномерности распластывания. Часть клеточного края теряет ламеллярную цитоплазму, а часть края, напротив, содержит обширные ламеллярные выросты. На начальной стадии распластывании клетка приобретает форму неправильного многоугольника или форму звезды. Постепенно часть выростов втягивается и исчезает, число направлений распластывания сокращается до 2-4-х. В клетке появляются стабильные и активные участки клеточного края. Клетки приобретают веретеновидную форму.