- •Ядрышко.
- •1.1.1.Метод серебрения.
- •1.1.4. Электронная микроскопия.
- •1.1.5. Метод молекулярной гибридизации in situ.
- •1.1.6. Выделение ядрышек.
- •1.2. Физические и химические свойства ядрышка.
- •2. Ультраструктурное строение ядрышка.
- •2.1. Фибриллярный центр (фц).
- •2.2. Плотный фибриллярный компонент (пфк).
- •2.3. Гранулярный компонент.
- •2.4. Околоядрышковый хроматин (охр).
- •2.5. Матрикс ядрышка.
- •2.6.Ядрышковая вакуоль («nucleolar vacuole»).
- •3. Функции ядрышка. Связь структуры и функций.
- •3.4. Некоторая роль в биосинтезе srp.
- •3.6. Тельца Кахаля.
- •Связь структуры и функций.
- •Динамичность ядрышка.
- •4. Белки ядрышка.
- •4.1. Аминокислотный состав ядрышка.
- •4.2. Специфические ядрышковые белки.
- •5. Строение и функционирование генов рРнк.
- •Гены класса I. Экспрессия.
- •Процессинг рРнк.
- •Гены 5s-рРнк.
- •6. Классификация ядрышек.
- •6.1. Нуклеолонемные ядрышки.
- •6.2. Ретикулярные ядрышки.
- •6.3. Вакуализированные ядрышки.
- •6.4. Кольцевидные ядрышки.
- •6.5. Ядрышки типа кора-сердцевина.
- •6.6. Компактные ядрышки.
- •6.7. Сегрегированные ядрышки.
- •6.8. Плотные фибрилляторные ядрышки.
- •6.9. Свободные фц.
- •6.10. Промежуточные типы ядрышек.
- •6.10.1. Нуклеолонемно-вакуолизированные (нуклеолонемно-кольцевидные) ядрышки.
- •6.10.2. Псевдонуклеолонемные ядрышки.
- •7. Ядрышко и клеточный цикл.
- •8. Морфогенез ядрышка.
- •8.2. Морфогенез ядрышка вследствие частичной гепатэктомии мышей и крыс.
- •Ядерно-поровый комплекс.
- •Описанные ниже структурная организация япк и транспорт через япк (пункты 1,2,3,6) были взяты из обзора е.В. Кисилевой (Институт цитологии и генетики со ран, Новосибирск).
- •С труктурная организация.
- •2.Транспорт через ядерную пору.
- •3. Регуляция транспорта молекул через ядерную пору.
- •3.1. Первая система.
- •3.2. Вторая система.
- •3.3. Третья система.
- •4. Импорт.
- •4. 1. Рецепторы импорта ядерных белков (импортины).
- •4.2. Ядерные белки: импорт, nls-зависимый механизм.
- •4. 3. Ядерные белки: импорт, nls-независимые механизмы.
- •5. Экспорт.
- •6.Сборка ядерных пор in vitro происходит через интермедиаты.
- •Ядерно-белковый матрикс.
- •Препараты и микрофотографии.
- •1. Препараты.
- •1. Включение 3нт в клетки культуры спэв. Расчет пролиферативного пула.
- •2. Включение 3ну в клетки культуры спэв.
- •3. Ооциты рыб. Амплификация ядрышка.
2. Включение 3ну в клетки культуры спэв.
3Н-уридин обычно используется как меченый предшественник РНК. Следует заметить, что он не обладает такой избирательностью включения в РНК, как 3Н-тимидин в ДНК. Уридин, превращаясь в дезоксиуридин, может подвергаться метилированию и включаться в ДНК в виде дезокситимидина.
Для получения препарата 3Н-уридин вводили в среду на 15 мин., то есть импульсно. Для проведения радиоавтографии культуру выращивают в чашках Петри на порезанных покровных стеклышках. Далее культуру «отмывали» от 3Н-уридина. Фиксацию проводили через определенное количество времени. Первая фиксация (из чашки Петри вынимается 1-2 предметных стеклышка) была через 15 минут после удаления метки из культуральной среды. На таких препаратах метка в основном выявляется над ядрышком. Вторая фиксация (из той же чашки Петри вынимают еще 1-2 стеклышка) – через 1 час после «отмывания» метки; метка в основном локализуется в ядре. Третью фиксацию проводит через 2 часа; метка «переходит» в цитоплазму.
3. Ооциты рыб. Амплификация ядрышка.
2. Электронные микрофотографии.
ЯДРЫШКО.
Ультраструктура ядрышка. Две ЭМФ.
Рибосомные гены в диссоциированных ядрышках ооцита тритона («елочки»).
Периферический хромосомный материал (матрикс хромосом). ЭМФ.
Перихроматиновый материал. Окраска на РНК. ЭМФ.
Bernhard, 1969 – цитохимический метод, выявляющий РНК или РНП.
Иммунофлуоресценция. Белки ядрышка: фибрилларин, В23.
Иммунофлуоресенция: DAPI.
Иммунофлуоресенция: совмещение DAPI, фибрилларин и В23.
ЯДЕРНЫЙ ПОРОВЫЙ КОМПЛЕКС.
Ядерный поровый комплекс. Тангенциальный срез.
Ядерный поровый комплекс. Метод замораживания-скалывания.
Ядерный поровый комплекс. Поперечный срез.